临床实验室要加强少见菌的分离和鉴定.pptVIP

临床实验室要加强少见菌的分离和鉴定 卫生部北京医院 张秀珍 病 例 一 患者，男性，48岁。因肺部感染于2002年2月住院。血培养5次，均阴性。痰培养12次，8次为正常菌群，2次分离到绿脓杆菌，1次分离到大肠杆菌，1次分离到鲍曼不动杆菌。临床均按药敏结果用药，但无效。经临床与实验室研究，继续痰培养，并同时做厌养培养。由于需要48h看第一次结果，培养皿放置72h，出现灰白，干燥菌落，染色为分支菌丝，革兰阳性。经鉴定为奴卡菌，临床用磺胺1周后退烧。 病 例 二 患者，男性，74岁，因下呼吸道感染住院，发烧38-39度，痰培养有绿脓杆菌，TBPCR3次均为阴性，TB培养于12天生长出淡黄色菌落，抗酸染色阳性，结核PCR阴性，继续培养至60天，报告结核菌培养阴性。3次TB培养均出现同样情况，疑为非典型分枝杆菌，经分类鉴定为累厉分枝杆菌，经会诊，用喹诺酮类治疗，病情很快好转。 几种主要的不常见菌 奴卡氏菌 新型隐球菌 非典型分枝杆菌 厌氧细菌 曲霉菌 奴卡氏菌的特征 大多发生于免疫低下的病人。多为肺部感染，晚期可全身播散。 生长缓慢，72h后可见到菌落。 革兰阳性。念珠状分枝菌丝。 抗酸染色常阴性，用硫酸代替盐酸脱色可呈阳性。 需氧生长可与放线菌区别。 在不含氯霉素的沙保弱培养基上生长良好。 实验室注意 标本不能放冰葙。 对诊断困难的病人的培养皿放置72h以上。 对菌落多做涂片。 从思想上要考虑奴卡菌的存在。 用硫酸做抗酸染色的脱色剂。 建议磺胺为首选药。 新型隐球菌特征 常感染于免疫低下病人，如，HIV、肿瘤、等。 墨汁染色，见到透明的厚夹膜。核有芽生。 革兰染色，圆球形的孢子而不是椭圆形，与念珠菌截然不同。 常可从CSF中分离到。 直接标本小白鼠脑内感染，夹膜阳性。 非典型分枝杆菌 非典型分枝杆菌是一群与结核分枝杆菌及麻风分枝杆菌生物性状不尽相同的分枝杆菌。但能引起结核样病变。 由于非典型分枝杆菌引起感染治疗方案与结核分枝杆菌有所不同，所以细菌室应加以区别并报告临床。 非典型分枝杆菌分类 非典型分枝与结核分枝的鉴别 可在低于37度温度下生长。易脱色。 生长速度较结核分枝杆菌快。 可产生色素。 於酸试验、耐热触酶试验、Tween80试验可做为传统方法鉴定，但太繁琐，可操作性差。 特异性探针或特异引物的PCR可区别。 厌养菌及感染 近年来，无芽胞厌氧杆菌和球菌已成为细菌性感染的主要原因之一，当深部脓肿、败血症等常规细菌学检查阴性时，往往源于厌氧菌感染。厌氧菌感染是一种内源性感染，病种遍及临床各科，身体各部位。 各种感染中厌养菌分离比例 各种感染中厌氧菌感染比例 临床常见厌氧菌分类 菌类 属 常见种 革兰阳性球菌 厌氧球菌属 厌气葡萄球菌、厌气链球菌 消化球菌、消化链球菌 革兰阴性球菌 厌氧球菌属 小韦荣球菌 大韦荣球菌 革蓝阴性杆菌 类杆菌属 脆弱类杆菌、产黑色素类杆菌、 梭形杆菌属 二路类杆菌、普通类杆菌、 普雷沃杆菌属 核梭杆菌、坏死梭杆菌、 卟啉单胞菌属 死亡梭杆菌、解糖普雷沃 无芽胞革兰阳性杆菌 放线菌属 伊氏、纳氏放线菌、 真杆菌属 不介糖真杆菌、迟缓真杆、 丙酸杆菌属 痤疮颗粒丙酸杆菌、 双歧杆菌属 短双歧杆菌、长双歧杆菌、 乳酸杆菌属 嗜酸乳酸杆菌 产芽胞革兰阳性杆菌 梭菌属 产气荚膜梭菌、难辩梭菌、 破伤风梭菌 最佳条件下各类厌氧菌分离比率 厌氧菌 分离率% 最多见 革兰阴性杆菌 40 类杆菌 革兰阳性厌氧球菌 24 消化球菌 革兰阴性厌氧球菌 3 韦荣氏球菌 无芽胞革兰阳性杆菌 20 真杆菌菌属、 丙酸杆菌 梭形芽胞杆菌 10 不定 可疑厌氧菌感染特征 感染局部产生气体 分泌物有恶臭 分泌物带血或呈黑色 粘膜周围的感染，如肛周、口腔、鼻窦、咽颊等 细菌培养阴性，但有菌血症表现 长期使用氨基糖苷类抗生素，但无效者 有基础疾病免疫低下者 简单步骤 (适用无条件作鉴定单位) 床边采样或输送培养基 　　　　　┌────────────────────┼───────────────────┐ 　　涂片记录 　　 厌氧血琼脂 　　　　 需氧培养 染色不匀 　　 平皿 羊血琼脂 典型厌氧菌 　　48h35℃厌氧培养