大豆油脂中磷脂的测定课件.pptVIP

* 摘要目的：应用薄层色谱扫描法鉴定样品中磷脂的含量，比较不同样品中磷脂含量。方法：展开剂为氯仿-甲醇-冰醋酸-丙酮-水（45:25:7:4:2）,磷显色剂显色。结果：北京卵磷脂中磷脂酰胆碱的含量大于70%，四川卵磷脂中含有所测的7种成分，大豆磷脂胶囊、美国卵磷脂胶囊和LECITHIN胶囊为口服剂型，磷脂总含量较低。结论：本法可作为磷脂质量控制的有效方法。 关键词：磷脂 薄层色谱扫描法 含量测定 马辰 段宏瑾 （中国医学科学院中国协和医科大学药物研究所 北京100050） 磷脂是动物与人体细胞膜重要组成部分，亦是生殖腺和精液的主要成分。磷脂中的不饱和脂肪酸是体内多烯酸的重要来源，尤其是机体正常需要而又不能合成的必需脂肪酸。今年来发现多烯酸对大脑细胞，特别是脑神经传导和生长发育有重要作用。本文探讨了7种磷脂的薄层分离、显色条件，对磷脂的开发利用及质量控制与评价提供了有效手段。 1仪器、试剂与样品 CS-930薄层扫描仪（岛津） 自制硅胶G板：硅胶G（青岛海洋化工厂）适量，加入0.5%硫酸铵溶液（含0.3%羧甲基纤维素钠），调匀后涂布于15cm*20cm玻璃板上，使用前110。C活化2h。 磷脂对照品：P磷脂酰胆碱（PC），溶血磷脂酰胆碱（LPC），磷脂酰乙醇胺（PE），磷脂酰肌醇（PI），神经鞘磷脂（SM），磷脂酸（PA）,磷脂酰丝氨酸（PS）均购于Signa公司。 磷脂样品：卵磷脂（四川），卵磷脂（北京），大豆磷脂胶囊（北京），卵磷脂胶囊（美国），L ECITHIN胶囊（美国） 试剂均为分析纯，水为去离子水。 2试验方法 2.1 对照品溶液的配制 精密称取PC,LPC,PI,SM,PA,PS等对照品各约20mg，置于50ml容量瓶中，加二氯甲烷溶解并稀释至刻度，摇匀，备用 2.2 磷脂显色剂的配制 溶液A：称取3g钼酸钠，加入15ml盐酸。溶液B：称取0.3g硫酸肼，加入25ml水，加热溶解。合并溶液A，B，置50。C水浴中30min，冷却后加水至300ml，溶液呈棕红色，避光保存。 2.3 测定方法 精密吸取样品液及对照品溶液各20u1点于硅胶板上。已展开剂氯仿-甲醇-冰醋酸-丙酮-水（45:25:7:4:2）饱和20min后，直立上行展开15cm。取出薄层板，挥干溶剂。喷显色剂后，喷10%硫酸甲醇液，斑点呈蓝色，薄层色谱图见图1 扫描测定 检测波长700nm;狭缝6nm*0.4nm。采用反射法线性扫描，测定灵敏度中。记录峰面积，用外标二点法计算含量。 1.混合对照品 2.北京卵磷脂（1） 3.北京卵磷脂（2） 4.四川卵磷脂 5.大豆磷脂胶囊 6.卵磷脂胶囊 7.L ECITHIN胶囊 图1 磷脂薄层色谱图 3 方法评价 3.1 标准曲线及线性范围 分别取磷脂混合对照品溶液6,10,16,20,30u1，点与同一块板上，按 2.3 方法展开、显色、测定。以磷脂对照品峰面积与磷脂对照品点样量进行回归分析，线性方程、相关系数及线性范围见表1 3.2 回收率实验 精密称取四川产卵磷脂70mg，置于50ml量瓶中，加入混合对照品各约25ug，加二氯甲烷溶液并稀释至刻度。2.3 方法展开、显色、测定，以外表二点法计算，测得回收率见表1 3.3 密度试验 用磷脂混合对照品溶液在同一块板上点样6次，每次点样量60ug，按2.3 方法展开、显色、测定，结果RSD分别为：LPC1.5%,SM1.8%,PC2.5%,PI2.3%,PS2.4%,PE2.8%,PA3.1% 3.4 稳定性测试 样品显色后，按2.3 方法测定3h，结果表明显色后3h稳定 表1 磷脂的线性方程、相关系数、线性范围及回收率 4 样品测定 称取样品约70mg，置于10ml量瓶中，用二氯甲烷溶解并稀释至刻度，摇匀，备用。分别系取适量，点于硅胶板上随行点磷脂对照品溶液，按2.3 方法展开、显色、测定、计算。结果见表2 注：n=4 表2 样品中磷脂含量测定 5 讨论 5.1 文献[1]报道，用0.02mol/l碳酸钠溶液涂碱性版，试用后发现，其斑点（尤其是PS与PI）拖尾严重，PS与PI不能分离。用0.5%硫酸铵溶液[2]铺板，可以较好的改善这一情况，通过展开剂氯仿-甲醇-冰醋酸-丙酮-水（45:25:7:4:2）达到PS与PI的分离，这一方法完成了7种磷脂的分离测定。 5.2 用选定的展开剂系统，改变硫酸铵的浓度，当硫酸铵浓度低时，磷脂中PS与PI的分离不好，且拖尾，如果硫酸铵的浓度高，PS,PI的Rf值增加，分离情况改善，最后选定的铵盐浓度是0.5% 5.3 磷脂在UV区只有末端吸收，故需经显色后，才能测定，曾采用碘蒸气熏板[3]后，封板测定，亦可稳定3h，但碘显色法的影响因素很多，用林显色剂喷版[4]，斑点呈蓝色，背景类白色，