嗜 热脂 肪芽 孢杆菌中耐 热蛋白酶 基 因的 克隆.PDFVIP

维普资讯 生 物 工 程 学 报 7(3)：207—212，109l ChineseIournalo／Biot~ohno~osy 嗜热脂肪芽孢杆菌中耐热蛋白酶基因的克隆 杨庆云 江行娟 吴 琳 崔玉良 杨树青 (复旦大学遗传所，上寿) 用鸟枪法把嗜热脂肪芽孢杆菌 313—1(供体菌)染色体上 的虿白酶基因克隆到质粒pPL603 上，井在枯草杆菌中得到表达。此基困位于6．6kb的EcoRI酶切片段上 ，带有重组质粒的枯草 杆菌所产生的蛋白酶活性比供体菌株约提高30倍左右。该酶的最适反应温度为 75℃，最适 pH为 7．0左右 ，是一个中性蛋 白酶 ，在8O℃作用30min后仍保留85 以上的酶括。 关■坶 鸟枪法，基困克隆I耐热性蛋 白酶基因 ● 耐热性蛋白酶反应温度高，具有 良好 株和供体菌株的性状相似。这方面工作在 的热稳定性，应用耐热性酶可以缩短反应 国内尚未见报道。 时问，节省冷却用水，在蚕丝、纺织、食 本文报道从～株唁热脂肪 芽 孢 杆 菌 品酿造、医药和洗涤剂等工业上将会产生 313-I克隆到一个耐热的蛋 白酶基因和 克 很大的经济效益。 隆菌株的部分性质。 近年来Sidier，W ．Z． ’和Takii，Y． 等 ，已经胰暗热脂肪芽孢杆菌中得 到耐 材 料 和 方 法 热的中性蛋 白酶，并研究了它们的性状。 1983~．Mikio，F|等 …用基因工程 技术 (一)材料 克隆到耐热的中性蛋 白酶基因，而且克隆 1．菌株与质粒：见表 1。 寰 l 一 糠 和 曩 啦 Table I Strai~sBⅡdplasmi~s 曹 株 和 质 粒 基 因 型 或 表 型 来 掉 或 文 献 Strains-ndplamnids Geaotypeorphenotype Sourc~orreference ● 嗜热瞎琦芽毫杆曹 3I3-I N 本所 B．stewro~ermo砷} s3l3-】 Thishstjtute 拈草杆曹 DB~ot His sprR~sprF]aAaprAs [‘) B．s“btills DBlD4 枯草杆菌 BG2os~ Aapr884AnprEs22 [5] B．subliHs BGz036 质粒 pPLe0~ Km [6] plamnidpPL6O3 2．培养基：(1)液体培养基一蛋 白 2 琼脂粉。(3)选择性培养基 (LKM) 胨(大五营养化学株式会社)1 ，酵母粉