猪胃蛋白酶原 A 基因密码子优化及在毕赤.docxVIP

猪胃蛋白酶原 A 基因密码子优化及在毕赤酵母中表达的研究 摘 要天冬氨酸蛋白酶一般被称为酸性蛋白酶，在酸性条件下可催化水解蛋白质，是目前重要的工业用酶之一。胃蛋白酶属于天冬氨酸家族，是研究蛋白质结构与功能关系的重要模型。胃蛋白酶广泛存在于脊椎动物胃液中。胃蛋白酶经济价值高，用途广泛，胃蛋白酶在制革、方便食品、奶、口香糖加工制造等行业也有一定的用处。目前，商业、医药途径获得的胃蛋白酶主要从动物胃组织中提取，受动物脏器资源的限制，胃蛋白酶价格较高;容易残留一些动物自身的蛋白酶类，如一些组织蛋白酶等。而微生物反应器具有效率高效，操作简单，能够降低成本等优点，所以，通过筛选微生物反应器，然后规模化生产胃蛋白酶颇有发展前途.本文利用基因工程开展胃蛋白酶的表达研究，为解决这些问题提供了新的研究方向。第一，根据Genebank上公布的猪胃蛋白酶原 A 基因序列，进行引物设计，通过RT-PCR克隆获得了湖北白猪胃蛋白酶原 A 基因cDNA全长，包括一个1158bp的读码框，编码385个氨基酸，其中N区包含15个氨基酸组成的信号肽，成熟的胃蛋白酶原A由370个氨基酸残基组成。与J04601比较，结果表明核苷酸和氨基酸相似性分别为99.3%和98.7%。序列已提交Genebank，登录号为EF108301。第二，在猪胃蛋白酶原 A 克隆和序列分析的基础上，构建了毕赤酵母胞内表达载体 pPIC3.5K-