3 3二吲哚甲烷调控stat3信号通路抑制卵巢癌细胞粘附 侵袭 迁移的实验研究 word格式.docxVIP

英汉缩略语名词对照英文缩写英文全称中文全称DIM3，3’-diindolylmethane3，3’-二吲哚甲烷STAT3Signal transducer and activator of transcription 3信号传导和转录活化因子3p-STAT3phosphorlated signal transducer and activator oftranscription3磷酸化的信号传导和转录活化因子3JAK2Janus kinase2Janus激酶2FBSFetal bovine serum胎牛血清PBSPhosphate buffer saline磷酸盐缓冲液MTT3-(4,5)-dimethylthiahiazo(-z-yl)-3,5-d iphenytetrazolium romide噻唑蓝DMSODimethyl sulfoxide二甲基亚砜WBWestern blot蛋白免疫印迹PVDFpolyvinylidenedifluoride聚偏二氟乙烯膜PMSFPhenylmethanesulfonylfluoride苯甲基磺酰氟SDSSodium dodecyl sulfate十二烷基硫酸钠rpmRevolution perminute转/分钟VEGFvascular endothelial growth factor血管内皮生长因子MMP-2matrix metalloproteinase2基质金属蛋白酶-2MMP-9matrix metalloproteinase9基质金属蛋白酶-9 shRNAshort hairpin RNA短发夹RNAPCRpolymerase chain reaction聚合酶链反应RTreversetranscriptase逆转录RNAiRNAinterferenceRNA干扰ggram克umolmicromole微摩尔13，3’-二吲哚甲烷调控STAT3信号通路抑制卵巢癌细胞粘附、侵袭、迁移的实验研究1摘要第一部分3，3’-二吲哚甲烷抑制STAT3通路影响卵巢癌细胞粘附、侵袭、迁移的实验研究目的观察3，3’-二吲哚甲烷（3，3’-diindolymethane，DIM）对人卵巢癌A2780、SKOV3 细胞侵袭和迁移能力的影响，并探究信号转导和转录激活因子3（signaltransducerandactivatoroftranscription 3，STAT3）信号通路在DIM抑制卵巢癌细胞侵袭和迁移中的作用。方法选取人卵巢癌SKOV3、A2780细胞为研究对象，经不同浓度的DIM处理后，分别采用细胞黏附实验、划痕实验和Transwell小室侵袭实验检测DIM对卵巢癌细胞黏附、迁移和侵袭能力的影响；应用蛋白质印迹法（Westernblot）检测DIM作用后对STAT3 及磷酸化STAT3（phospho-STAT3，p-STAT3）、VEGF和MMP-2、MMP-9蛋白表达水平的影响。结果DIM 处理后，细胞的黏附能力受到明显抑制，并呈浓度依赖性；划痕实验表明，DIM处理后细胞的迁移能力明显下降，其划痕愈合率明显降低（P＜0.05）；Transwell小室检测显示，在A2780细胞中，DIM（50和100μmol/L）处理组的（326±20.15）和（59.33±13.32）个/视野，与对照组中穿过基质膜的细胞数（537.33±53.15）个/视野相比，发生侵袭的癌细胞数明显减少（P＜0.01）；在SKOV31[基金项目]重庆市科技攻关项目(CSTC2012gg-yyis10002)2细胞中，DIM（50和100μmol/L）处理组的（437±23.15）和（49.33±10.92）个/视野，与对照组中穿过基质膜的细胞数（926.33±43.15）个/视野相比，发生侵袭的细胞数显著减少（P＜0.01）。蛋白质印迹法检测结果显示，STAT3 总蛋白的表达水平无明显差异，但其磷酸化（p-STAT3）蛋白的表达水平下调，并伴有VEGF、MMP-2和MMP-9表达的同步下调，差异有统计学意义（P＜0.05）。结论DIM能显著抑制卵巢癌SKOV3、A2780细胞的粘附、侵袭、迁移能力，其可能通过抑制STAT3的磷酸化，降低VEGF和MMP-2、MMP-9 蛋白的表达水平而起作用，提示DIM有可能成为一种有潜在效用的抗卵巢癌的药物。关键词:3，3’-二吲哚甲烷，人卵巢癌细胞，侵袭，粘附，信号传导和转录活化因子3第二部分3，3’-二吲哚甲烷与shRNA-STAT3抑制卵巢癌细胞粘附、侵袭、迁移的实验研究目的探讨阻断STAT3信号通路与DIM卵巢癌细胞后对其粘附、侵袭、迁移的影响，并探究其机理，为靶向肿瘤基因治疗提供实验依据。方法1．本实验构建pGC-STAT3-shRNA(shorth