3r 6rbassiatin1抗人乳腺癌细胞mcf7作用机制研究 word格式.docxVIP

摘 要越来越多的临床和实验数据表明，雌激素尤其是 17-β 雌二醇在雌激素受体阳性 (ERα+)的乳腺癌和乳腺癌细胞的生长中起着极其关键的作用。雌二醇的促增殖作用主 要是通过雌激素受体，尤其是雌激素受体 α(ERα+)介导的。当雌二醇与雌激素受体 α 结合以后，雌激素介导的两条途径：基因组途径和非基因组途径都会被激活。雌激素与受体结合后空间结构改变并形成二聚体，与 DNA 的结合区就会暴露出 来，二聚体进入细胞核可以与特定的 DNA 序列（雌激素反应元件 ERE）结合，并募 集其他转录因子形成转录复合物启动下游基因的转录。含有 ERE 元件的主要基因 cyclin D1, PR 都是雌激素的应答基因，在雌激素进入细胞几小时后，此基因组途径发 生应答，这些基因的转录被激活。cyclin D1, PR 都是促乳腺细胞生长增殖的基因。在 乳腺癌组织中这些基因的激活将促进肿瘤的生长和转移。近年来，发现在经典的雌激 素基因组途径之外还有一条非基因组信号转导途径。基因组途径的应答，整个过程通常需要几个小时，而非基因组作用则快得多，在 几分钟，甚至几秒钟之内就能够完成。雌激素与细胞膜上的雌激素受体结合后，雌激 素受体通过与 G 蛋白的直接或者间接偶联，激活 PI3K/AKT, MAPK 等下游的信号转 导通路，从而促进肿瘤的发生和增殖，引起雌激素的快速应答效应。除手术治疗外，抗雌激素药物治疗成为目前治疗雌激素受体阳性的乳腺癌的有效 疗法之一。临床药物他莫西芬（tamoxifen）是一种常规的乳腺癌治疗药物。他莫西芬， 结构与雌激素相似，在机体中与雌激素竞争性的结合雌激素受体，抑制雌激素引起的 下游信号通路从而限制了癌细胞的增殖达到抗肿瘤的目的。尽管如此，并非所有的雌 激素受体阳性(ERα+)的乳腺癌都可以通过他莫西芬治疗，而且随着他莫西芬治疗的深 入，耐药性的问题也是存在的。所以寻找治疗乳腺癌的新药尤为重要。化合物(3R, 6R)-Bassiatin (1)是从厚藤的寄生菌，尖孢镰刀菌 J8-1-2 中分离出来的 一种二氧吗啉生物碱。我们发现(3R, 6R)-Bassiatin (1)具有抗雌激素增殖的效果。(3R, 6R)-Bassiatin (1)作用于人乳腺癌细胞 MCF-7 时，能够抑制细胞增殖，引起细胞周期 阻滞，诱导细胞凋亡。而且化合物还能抑制雌激素受体 ERα 的基因和蛋白水平的表 达；在 17-β 雌二醇存在的情况下，还会抑制雌激素反应性基因 cyclinD1 和 PR 的转 录。结果显示，(3R, 6R)-Bassiatin (1)可能是一种新型抗雌激素化合物。我们发现在添加和不添加 17-β 雌二醇的条件下，(3R, 6R)-Bassiatin (1)都能抑制 雌激素受体 α 的 mRNA 和蛋白表达，但在添加雌二醇的条件下，这种抑制效果更明 显，雌激素受体 α 表达水平更低。CyclinD1 是一种细胞周期相关性蛋白，在促使细 胞通过 G1 期检验点，从 G1 进入 S 期过程中发挥重要作用。同时 cyclinD1 也是一种雌激素反应性基因，具有 ERE 元件，同样的还有 PR 基因。我们观察到在 17-β 雌二醇存在的条件下，(3R, 6R)-Bassiatin (1)可以降低 cyclinD1，PR 的转录水平，而在 17-β 雌二醇不存在的条件下，添加(3R, 6R)-Bassiatin (1)， cyclinD1，PR 的转录水平几乎 没有变化。这提示(3R, 6R)-Bassiatin (1)可能阻断了雌激素的基因组应答途径，引起 cyclinD1，PR 转录抑制。此外，在 17-β 雌二醇存在的条件下，Cyclin D1 的 Thr286 磷酸化增加。Cyclin D1 的 Thr286 磷酸化是 Cyclin D1 走向泛素化降解的标志。因此， (3R, 6R)-Bassiatin (1)可能还引起了 Cyclin D1 磷酸化的降解增加，从而使得 Cyclin D1 水平进一步降低。Cyclin D1 水平的降低，部分地解释了(3R, 6R)-Bassiatin (1) 在 17-β 雌二醇存在的条件下引起的 G1 期阻滞。另外，(3R, 6R)-Bassiatin (1)还会引起 ERK-MAPK 的激活和 GSK3β 的失活， ERK-MAPK 的激活可能诱导了细胞凋亡。但 GSK3β 作为抑癌基因之一，其抑癌活性 却被抑制，这说明细胞在凋亡的同时，可能仍然激活存活通路以对抗凋亡。总之，我们通过实验发现，(3R, 6R)-Bassiatin (1)能抑制雌激素受体 α 的 mRNA 和蛋白表达，抑制雌激素反应性基因 cyclinD1 和 PR 的转录，引起细胞周期阻滞，诱 导细胞凋亡。我们猜测，(3