26nor8羟基α芒柄花醇对成骨细胞活性影响的实验研究 word格式.docxVIP

摘 要玉柏石松为石松科石松属植物，在我国的一些民族医药中作伸筋 草入药，具有治疗骨折和跌打损伤的作用。现代临床医学研究也证实 其具有一定的促进成骨作用。但是，其有效成分是什么，这些有效成 分通过什么途径起作用，目前尚不清楚。因此，本研究拟以玉柏石松 中分离出的一种新型化合物四环三萜 26-nor-8- 羟基 -α- 芒柄花醇 （26-nor-8-hydroxy-α-onocerin，简称 26HO）为对象，研究其对体外 培养的成骨细胞分裂增殖和成骨相关基因表达的影响，以期阐明其是 否为治疗骨折的有效成分及其治疗骨损伤的分子机制。本文研究了 26HO 对体外培养的成骨细胞的细胞增殖、碱性磷酸 酶的活性、及成骨相关基因(碱性磷酸酶 ALP、骨涎蛋白 BSP、I 型胶 原 Col I、骨钙蛋白 OC、骨粘连蛋白 ON、骨桥蛋白 OP、转录相关 因子 Runx2 和 Osterix)表达的影响。用组织块改良法分离小鼠颅盖骨成骨细胞。分离培养的细胞形态 正常，表现出较强的活性，经鉴定为成骨细胞。MTT实验结果表明：较高浓度（20μM/L，40μM/L）26HO短期（1 天）处理可以促进成骨细胞增殖。长期（3天）处理对成骨细胞 增殖没有显著影响。研究表明，26HO 处理可以影响原代成骨细胞的碱性磷酸酶活性。 总体来讲，随着培养时间的延长（从 3 天至 14 天），低浓度的 26HO（5μM/L）由促进成骨细胞碱性磷酸酶活性逐步变为抑制作用；高浓度(20-40μM/L)26HO 则由抑制成骨细胞碱性磷酸酶活性逐步变为促进作用。实时定量 PCR 的结果显示，26HO 短期处理（3 天）会抑制成骨 细胞 osterix 和 Runx-2 的表达；总体来讲，26HO 不利于 BMP-2 和 BSP 的表达，对很多其他骨相关基因表达则呈现出复杂性。本研究结果说明，26HO 具有调控成骨细胞增殖和分化的能力， 是玉柏石松治疗骨折等骨疾病的有效成分之一。该研究为玉柏石松作 为促进成骨药物在临床上的应用提供了实验依据。关键词：26-nor-8-羟基-α-芒柄花醇，成骨细胞，细胞增殖率，碱性磷 酸酶，成骨相关基因表达ABSTRACTLycopodium obscurum L. from Lycopodium, is a traditional Chinese herbal medicine which is used for treatments of bone fracture, traumatic injury and contusion. Modern clinical medical research has demonstrated that it can enhance osteogenesis. However, we don’t know what are the effective components and how do they work, There is no answers to these questions. Therefore, in this thesis, 26-nor-8-hydroxy-α-onocerin（26HO）, a novel tetraeyclic triterpenoid extracted from Lycopodium obscurum L. was studied on its effects on osteoblast proliferation, alkaline phosphatase activity and osteogenic gene expression, in order to elucidate the molecular mechanism of its osteogenic activity.In this study, the effect of 26HO on osteoblast proliferation, osteoblast proliferation, alkaline phosphatase activity and osteogenic gene expression(BSP, ON, Col I, OC, Osterix, OP, ALP and Runx2) in vitro was studied.Primary cultured osteoblasts was isolated and purified from calvaria of 2-3 days old mice with a modified tissue culture method. Result showed that purified primary osteoblasts