【DOC】流式细胞术细胞周期分析小鼠肺组织样本制备方法的优化研究.docVIP

流式细胞术细胞周期分析小鼠肺组织样本制备方法的优化研究 现代检验医学杂志第26卷第6期2011年11月JModLabMed,VoL26,NA6,Nove.201163 流式细胞术细胞周期分析 小鼠肺组织样本制备方法的优化研究 贾宇臣,王利,郑源强,赵凯.,陈琦 (1.内蒙古医学院分子生物学研究中心,呼和浩特010059; 2.呼和浩特市第一医院小儿内科,呼和浩特010030) 摘要:目的寻找细胞周期分析更好的样本处理方法.方法以小鼠肺组织作为标本,采用四种方法(剪碎法,研磨法, 剪碎结合酶消化法,研磨结合酶消化法)制备单细胞悬液,胎盘蓝染色检测细胞的存活率,经不同时间固定后的样本利用流 式细胞仪进行细胞周期分析.结果剪碎法结合酶消化法制备的单细胞悬液效果最佳;单细胞固定后两周内细胞各个时 期所占比例基本相同.结论小鼠肺组织单细胞制备采用剪碎法联合酶消化法优于其他三种方法,样本经固定处理后可 以进行流式批量检测. 关键词:流式细胞术;单细胞悬液;肺组织;细胞周期分析 中图分类号:R一332文献标志码:A文章编号:1671—7414(2011)06—063—03 doi:10.3969/j.issn.1671—7414.2011.06.020 OptimizingStudyonIungTissueSamplePreparationof theMouseandCellCycleAnalysisbyFlowCytometer JIAYu-then,WANGLi,ZHENGYuan-qiang,ZHAOKai,CHENQi (1.ResearchCenterofMolecularBiology,InnerMongoliaMedicalCollege, Hohhot010059.China;2.DepartmentofPediatricMedicine. theFirstHOSpital0fHohhot,Hohhot01003O,China) Abstrat:0bjectiveToexplorethemechanicalmethodsformakinglungtissueintosinglecellsuspension.MethodsLung tissuesamplespreparationofthemousegotbyfourmethods(“cut”withsissors,grinding,”cut”withsissorscombinedwith enzymaticdigestion,grindingwithenzymaticdigestion)weredetectedwithmicroscropandflowcytometry.Theviabilityand morphologicchangesofthesinglecellwereobservedbytypanblueexclusion.Cellcycleofsinglecellsuspensionfixedatdif— ferenttimewasanalysedbyFCM.ResultsThemethodof”cut’’withsissorscombinedwithenzymaticdigestionwasthe best.ThesampleforcellcycleanalysisbyFCMcouldsavefor2weeks,andtherewerenosignificantdifferenceintheper— centageofGO/G1,SandG2/M.ConcisionThemethodof”cut”withsissorscombinedwithenzymaticdigestionfor makinglungtissueintosinglecellsuspensionwasthebest.Samplesfixedcanbeanalysedinvolume-testingbytheFCM. Keywords:flowcytometry;singlecellsuspension;lungtissue;cellcycleanalysis 流式细胞分析(flowcytometry,FCM),又称剂为10mmol/LHEPES—NaOH,pH7.4)(德国 流式细胞术,是一种在功能水平上对单细胞或其他 生物粒子进行定量分析和分选的检测手段,具有速 度快,精度高,准确性好等特点[】].目前,流式细胞 分析已普及应用于免疫学,血液学,肿瘤学,细胞生 物学,细胞遗传学,生物化学等临床医学和基础医 学研究领域L1]. 1材料与方法 1.1材料 1.1.1主要仪器:美国BD公司FACSCalibur型 流式细胞仪,NikonXD1B倒置显微镜,Sigma离 心机,OLYMPUS普通光学显