ampkpparαscad信号途径对心肌肥大的调控研究 word格式.docxVIP

ii目录中文摘要I[Abstract]…………………………………………………………………………………...III引言1第一章敲低短链酰基辅酶A脱氢酶对心肌细胞的影响51. 前言……………………………………………………………………………………...52．材料与方法………………………………………………………………………………62.1实验材料62.1.1 实验动物62.1.2 主要药物与试剂62.1.3 主要实验仪器和器材72.1.4 主要试剂的配制82.2主要实验方法92.2.1 乳鼠心肌细胞原代培养92.2.2 心肌细胞表面积测定102.2.3 心肌细胞游离脂肪酸的含量测定102.2.8 实验分组192.2.9 统计学分析203. 实验结果………………………………………………………………………………..203.1乳鼠心肌细胞原代培养和鉴定203.2 siRNA干扰序列的筛选213.3 PE和干扰序列1186 构建体外心肌细胞肥大模型223.3.1 对心肌细胞表面积及脂质代谢的影响223.3.2 目的基因的表达与SCAD酶活性变化244.讨论……………………………………………………………………………………25第二章心肌肥大中PPARα对SCAD的调控271.前言……………………………………………………………………………………272. 材料与方法……………………………………………………………………………..282.1实验材料282.1.1 实验动物282.1.2 主要药物与试剂282.1.3 主要实验仪器和器材292.1.4 试剂的配制302.2主要实验方法302.2.1 乳鼠心肌细胞原代培养302.2.2 心肌细胞表面积测定302.2.3 心肌细胞游离脂肪酸的含量测定302.2.4 心肌细胞短链酯酰辅酶A脱氢酶活性测定312.2.5 用RT-PCR方法检测心肌细胞中目的基因的表达312.2.6 用Western blot方法检测心肌细胞中目的基因的表达312.2.7 实验分组312.2.8 统计学分析313. 实验结果………………………………………………………………………………..313.1非诺贝特对PE 刺激后心肌细胞表面积及游离脂肪酸含量的影响313.2非诺贝特对PE 刺激后PPARα、SCAD表达及SCAD酶活性的影响333.3非诺贝特对1186 敲低SCAD基因的心肌细胞保护作用344.讨论……………………………………………………………………………………37第三章心肌肥大中AMPK对PPARα/SCAD信号途径的调控391.前言……………………………………………………………………………………392. 材料与方法……………………………………………………………………………..402.1实验材料402.1.1实验动物40ii2.1.2 主要药物与试剂402.1.3 主要实验仪器和器材412.1.4 试剂的配制422.2主要实验方法422.2.1 乳鼠心肌细胞原代培养422.2.2 心肌细胞表面积测定422.2.3 心肌细胞游离脂肪酸的含量测定422.2.4 心肌细胞短链酯酰辅酶A脱氢酶活性测定422.2.5 用RT-PCR方法检测心肌组织中目的基因的表达422.2.6 用Western blot方法检测心肌细胞中目的基因的表达432.2.7 实验分组432.2.8 统计学分析433. 实验结果………………………………………………………………………………..433.1AICAR 对心肌细胞表面积及游离脂肪酸含量的影响433.2AICAR 对p-AMPKα、PPARα和SCAD表达及SCAD酶活性的影响444.讨论……………………………………………………………………………………46总结与展望47参考文献48附录一英文缩略词表53附录二在学期间完成的论文55致谢56iiiivAMPK/PPARα/SCAD信号途径对心肌肥大的调控研究中文摘要目的：研究短链酰基辅酶A脱氢酶（short-chain acly-coenzymeAdehydrogenase，SCAD）在心肌肥大中的作用及腺苷酸活化蛋白激酶（adenosine monophosphate activated protein kinase，AMPK）/过氧化物酶体增殖剂活化受体α（peroxisome proliferator-activated receptorα，PPARα）对SCAD的调控。方法：(1)使用Western-blot、RT-PCR和酶活性测定的方法，检测干扰序列干扰后短链酰基辅酶A脱氢酶（SCAD）的表达和酶活性变化，筛选干扰SCAD 的最优干扰序列，检测最优干扰序列1186 刺