使用AgilentAdvanceBioAAA色谱柱.PDFVIP

应用简报 制药与食品检测 使用 Agilent AdvanceBio AAA 色谱柱 分析在线衍生氨基酸 作者 摘要 陆予菲 本文开发出一种能够对氨基酸进行快速和高分析灵敏度定量分析的液相色谱 (LC) 方 安捷伦科技公司 法。此方法采用安捷伦自动进样器与填充表面多孔颗粒填料的 Agilent AdvanceBio AAA 色谱柱进行自动化在线柱前氨基酸衍生与色谱分离，成功应用于在三种不同样 品基质中对 23 种氨基酸进行液相色谱分离与精确测定。 前言 实验部分 氨基酸标准溶液的配制 氨基酸分析历来都是色谱分析中的难点， 仪器与试剂 将 1 mL 安瓿瓶装的 250 pmol/µL 氨基酸 在食品、制药和生物等行业中有广泛应 标准品平均分装成 10 份，每份 100 µL。 Agilent 1260 Infinity 液相色谱仪，配备下 用。如何高效地分析不同种类的氨基酸， 将每份样品置于样品瓶的内插管中。盖好 列安捷伦组件： 是许多分析化学工作者面临的问题。许多 样品瓶，在 4 °C 下储存。 • G1312B 二元泵 市场上的方法均存在缺陷，如色谱柱在高 从氨基酸补充剂试剂盒中准确称取 pH 下寿命短、分析效率低、稀有试剂不 • G1367D 液体自动进样器 59.45 mg 天冬酰胺、59.0 mg 羟脯氨酸、 易获取等。 • G1316A 柱温箱 65.77 mg 谷氨酰胺和 91.95 mg 色氨酸。 本文开发出的液相色谱方法，可实现氨 • G4212B 二极管阵列检测器 然后将这些氨基酸加入 25 mL 容量瓶中， 基酸的高分析速度和高分析灵敏度定量 再加入 12.5 mL 0.1 M 盐酸溶液，超声直 分析。此方法采用可靠的在线柱前氨基 本实验选用的色谱柱为 Agilent AdvanceBio 至氨基酸溶解。然后用水稀释至刻度，摇 酸衍生，结合填充表面多孔颗粒填料的 AAA C18，4.6 × 100 mm, 2.7 µm （部件号 匀，并作为氨基酸补充剂储备液 1 在 4 °C Agilent AdvanceBio AAA C18 色谱柱进行 655950-802）。 下储存。 色谱分离。使用安捷伦自动进样器可轻松 甲醇和乙腈为色谱纯，购自迪马科技公 从氨基酸补充剂试剂盒中准确称取 实现自动化在线衍生，其中一级氨基酸用 司。盐酸、磷酸氢二钠和硼酸钠为分析 58.58 mg 正缬氨酸和 44.54 mg 肌氨酸， 邻苯二甲醛 (OPA) 进行衍生，二级氨基酸 纯，购自百灵威科技公司。实验用水为 将其加入 50 mL 容量瓶中。然后向容量 用 9-芴甲基氯甲酸酯 (FMOC) 进行衍生。 Millipore Milli-Q 超纯水系统制得的超纯去 瓶中加入 25 mL 0.1 M 盐酸溶液，超声至 本分析所需的所有试剂和氨基酸标准品均 离子水。23 种氨基酸参比标样（表 1）、 氨基酸溶解。然后用水稀释至刻度，摇 来自 AdvanceBio 氨基酸分析试剂盒。 OPA、FMOC 和硼酸盐缓冲液来自安捷伦 匀，并作为氨基酸补充剂储备液 2 在 4 °C 科技公司的