茯砖茶中“金花”菌产孢机制及其功能性研究-发酵工程专业论文 word格式.docxVIP

茯砖茶中“金花”菌产孢机制及其功能性研究摘要茯砖茶是经独特“发花”工艺形成的一种后发酵茶，其“发花”过程是优势菌“金花”菌大量繁殖的过程，多数研究表明“金花”菌是冠突散囊菌。冠突散囊菌独特的生长、繁殖和代谢过程，使茯砖茶具有消食健胃、调脂降压和降脂减肥等保健功能，不同营养物质和培养条件对冠突散囊菌的生长及茯砖茶的“发花”过程产生影响，从而引起功能性成分和茯砖茶品质的变化。本研究以冠突散囊菌为菌种，研究了冠突散囊菌在不同营养及培养条件下的产孢规律、黄色素变化规律，以及孢子产生与黄色素之间的关系；采用薄层层析(TLC)、高效液相色谱(HPLC)以及红外光谱(IR)分析法对冠突散囊菌所产生的黄色素和降脂类物质进行了初步分析研究。得出以下结果：1.以冠突散囊菌的菌落形态、菌落直径、有性孢子和无性孢子的数量、黄色素的吸光度为指标，通过改变CZG培养基的碳源(蔗糖、葡萄糖)和碳源的浓度(1%、3%、5%、7%、10%-90%)、氮源(硝酸钠、硝酸铵、硫酸铵) 和氮源的浓度(0.1%、0.3%、0.5%、0.7%、1%、3%-11%)、无机盐(氯化钠、氯化钾)和无机盐的浓度(1%-17%)、培养温度(15℃、20℃、25℃、28℃、32℃、35℃、40℃)以及培养基的pH(3-9)，探寻不同营养条件下冠突散囊菌的产孢规律和黄色素变化规律。单因素和正交试验表明：冠突散囊菌产有性孢子和黄色素的最佳条件：蔗糖3%、硝酸铵0.7%、氯化钾3%、培养温度28℃、pH为7，冠突散囊菌黄色素的含量与有性孢子数量成正相关系，与无性孢子数量成反相关系。当碳源浓度为1%-20%、氮源浓度为0.1%-0.7%、盐离子为1%-5%、温度为15℃-28℃、pH为6-7时，冠突散囊菌以有性繁殖为主，几乎不产生无性孢子，当碳源浓度为20%-90%、氮源浓度为0.7%-11%、盐离子为5%-15%、温度为28℃-40℃、pH 为3-6 和7-9时，冠突散囊菌以无性繁殖为主，无性孢子数量远大于有性孢子。2.利用液体发酵技术对冠突散囊菌产降脂类物质-洛伐他汀进行试验研究，以洛伐他汀（色谱纯）为对照，通过薄层层析和高效液相色谱分析，结果显示：冠突散囊菌液体发酵液中含有洛伐他汀，其含量为6.199mg/L。表明冠突散囊菌具有产生洛伐他汀的能力。3.对冠突散囊菌所产黄色素的研究(1)用石油醚对黄色素进行提取、过滤、减压浓缩和挥发溶剂后得到黄色素粗品，其得率为1.25%。黄色素抑菌试验显示：黄色素对金黄色葡萄球菌的抑菌圈直径为(10.57??0.35)mm，对金黄色葡萄球菌的最低抑菌浓度小于%；对大肠杆菌的抑菌圈直径为(0.70??0.31)mm，对大肠杆菌抑菌的最低抑菌浓度大于3%。(2)通过薄层层析对黄色素粗品进行分离纯化，结果表明：薄层最佳展开剂为石油醚:丙酮:甲醇(10:1:2)，展开结果为6条色带，各色带的Rf值分别为0.84、0.48、0.40、0.38、0.30、0.24；在相同展开剂下对一次展开中黄色素含量最高的两条色带进行二次展开，其中Rf为0.40的条带又被展开为2条色带，Rf分别为0.64 和0.34；Rf为0.38的条带被展开为3 条色带，Rf 分别为0.74、0.45、0.31。(3)对二次分离的5条色带进行紫外扫描和红外扫描，紫外扫描结果显示：5 种色素在213nm附近都有吸收峰，Rf为0.64 的色素在250-300nm内含有3 个吸收峰，其余4种色素在250-300nm内含有2个吸收峰，在300nm以上，除Rf为0.34的色素无吸收峰外其它4种色素都含有吸收峰；红外结果表明4-1 号色素含有官能团O–H、–CH3或–CH2、C=O、C–O，4-1号色素可能为蒽醌类衍生物，4-2号色素含有官能团O–H、CH3或–CH2、C=O和芳环中C=C，4-2号色素可能为蒽醌杂环类物质，4-3 号色素含有官能团O–H、–CH3、C=O、C–O、C–N，4-3号色素可能为酰胺类物质，3-1号色素含有官能团O–H、–CH3、C=O、C–O，3-1 号色素可能为酚醛类物质。关键词：冠突散囊菌，有性孢子，无性孢子，色素，洛伐他汀STUDYONSPORULATIONMECHANISMANDFUNCTIONOF‘JINHUA’FUNGIINFUZHUANBRICKTEAABSTRACTFuzhuanBrickTeaisonekindofthepostfermentationteawhichwas formedbyuniquefermentationprocessthroughmultiplingdominantbacteria, manyscholarsbelievethatthe‘Jinhua’fungiisEurotiumcristatum.Eurotium cristat