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金开瑞客户应用引物合成技术文章分享 一站式科研技术服务商—武汉金开瑞生物 DNA 中 5-醛基尿嘧啶的富集与荧光标记检测 基本信息 题目：Both enrichment and fluorogenic labelling of 5-formyluracil in DNA（DNA 中 5-醛基尿嘧啶的富集与荧光标记检测） 期刊：Chemical Science 影响因子：9.144 主要技术：引物合成 研究背景 2014 年德国慕尼黑大学大学 Thomas Carell 教授首次报道了 TET 酶可以氧化胸腺嘧啶变成 5 羟甲基尿嘧啶（Nat. Chem. Biol. 2014, 10, 574）。这一结果揭示了胸腺嘧啶（T）的氧 化 产 物 （ 5hmU 、 5fU 、 5caU ） 可 能 存 在 着 一 定 的 表 观 学 意 义 。 2015 年 剑 桥 大 学 Balasubramanianshanker 筛选了一系列的生物素化的有机小分子用于 5 醛基尿嘧啶的富集 （J.Am. Chem. Soc., 2015, 137, 9270），并于今年，将其用在针对真核生物的寄生虫利 什曼原虫 （eukaryote parasite Leishmania） 的 5 羟甲基尿嘧啶的全基因组测序(Genome Biol， 2017,18，23)。DNA 的氧化损伤是诱发多种疾病的重要因素之一。而人体中 DNA 的主动去甲 基化过程，本身就伴随着对修饰碱基的氧化损伤-切除修复。而醛基修饰碱基是体内 DNA 损 伤修复的关键中间体。 研究内容 2017 年武汉大学首次报道了一个丙二醇保护的 5fU 固相合成 DNA 单体，并将其结合到 了 传 统 的 DNA 固 相 合 成 中 ， 实 现 了 对 这 一 技 术 的 突 破 （ Nano Res., 2017, DOI:10.1007/s12274-017-1445-2.）（见图 1）。传统的 5fU-DNA 链的合成主要通过 Pt 催 化-氧化锇氧化-高碘酸钠氧化，由于其使用的催化剂剧毒限购，对设备要求高，使得很长时 间，5fU-DNA 合成没有显著的突破。值得一提的是，武汉大学这项技术的革新突破，结合我 司优势资源。由研究团队提供 DNA 固相合成单体，我司定制引物合成业务，可以非常高效保 质保量的在短期内合成。（见图 2） 图 1 5fU 固相合成单体的合成过程 (b) 图 2 (a)武汉金开瑞提供合成的高纯度的 5fU-DNA 链液相色谱图（b）PAGE 图 一站式科研技术服务商—武汉金开瑞生物 近日，国际著名学术期刊《Chemical Science》（IF=9.144）发表了武汉大学在这个 领域内的最新成果（Chem. Sci., 2017, DOI:10.1039/C7SC00637C）。该研究团队设计合成 一个生物素化的含有邻苯二胺结构的萘酰亚胺探针，并将其用于荧光检测在 Hela 细胞中经 过伽马射线诱发产生 5fU，以及实现对 5fU 的选择性富集。其中小分子的作用机理是，通过 邻苯二胺中的氨基富裕的电子发生 PET 效应， 猝灭了萘酰亚胺的荧光。 当探针分子高选择性 的与 5fU 发生共价作用以后，PET 效应消失，荧光重新恢复。并且这个探针接有生物素，可 以在后期应用于生物素-亲合素系统(Biotin-Avidin—System,BAS)， 实现对 5fU 的选择性富 集（见图 3）。 图 3 基于 PET 荧光淬灭效应选择性富集荧光检测的生物素化邻苯二胺-萘酰亚胺探针分子 研究结果 1、生物素化的邻苯二胺-萘酰亚胺探针分子对含有 5fU-DNA 链的选择性反应 研究人员首先试了含有 5fU 的人工合成的 DNA 链，通过高效液相色谱，DNA 凝胶电泳， 荧光仪器以及聚合酶中止反应证明了探针分子对 5 醛基尿嘧啶反应完的高选择性 （见图 4） 。 图 4 生物素化的邻苯二胺-萘酰亚胺探针分子选择性与 5fU 反应 2、对伽马射线处理 Hela 细胞的成像 一站式科研技术服务商—武汉金开瑞生物 作者将 Hela 细胞分成了三组，分别是进行伽马射线照射，不加化合物；不进行伽马射线照 射，加化合物，以及伽马射线处理后进行化合物孵育（见图 5）。 图 5 生物素化的邻苯二胺-萘酰亚胺探针分子对 Hela 细胞荧光显色作用 文章小结 该研究创建了一个生物素化的邻苯二胺-萘酰亚胺探针分子，不仅可以在生理条件下的荧光 标记 5fU，还能对其进行选择性的富集。这一策略可以应用于伽马射线处理以后的 Hela 细 胞中， 也具有用来研究整个基因组修饰碱基含量的潜能。 设计针对 5fU 检测的化合物的策略 可能适用于其他含有邻苯二胺猝灭的荧光基团。 文献来