生命科学研究菌落计数在常规的微生物学中不管是食品卫生.DOCVIP

生命科学研究 菌落计数 在常规的微生物学实验中，不管是食品卫生细菌学检测，还是药品微生物限度检查，还是研究活性物质的抑菌性能实验，都常常需要对样品中的微生物进行定量或者浓度计算；众多微生物定量方法中最常用的就是对培养后的皮氏培养皿上所生长菌落进行总数统计的菌落总数统计定量方法。 菌落总数统计定量方法因为它的准确性、灵敏性、简便经济和可产生纯培养等优点而自19世纪末Koch和Petri先后发明固体培养基和双层培养皿后沿用至今。100多年以来，这种方法在新型培养基配方方面产生了很多改进和发明，然而在最耗费人力和影响准确性的菌落计数环节进展不大。 目前，大多数实验室仍采用传统的人工肉眼结合菌落计数器的计数方法：借助放大镜的观察，用计数笔点击每一个菌落，计数器计数每一个点击产生的压力电子脉冲得出总数。这样虽然成本低廉，但有以下几大缺点： 1.识别和记数错漏：所有的计数都依靠对压力脉冲产生次数的记录，不同人员的操作产生的压力不同就难免产生漏记，而且计数的结果也因操作人员对菌落的识别经验不同而产生差异 ，系统偏差较大。 2. 标记和修正不便：肉眼计数和菌落计数器计数都依靠计数笔在被统计的菌落上留下墨水笔迹来进行标记，因此在存在密集菌落的情况下就标记不便，而且发现误统计时需擦去墨水痕迹导致修正不便。 3. 效率低下：肉眼计数和菌落计数器计数都需要人工用肉眼识别每一个菌落，因此一旦样品较多就会耗费大量的时间，影响研究或是结果报告的效率。 4. 原始结果无法保存：在做完统计后，留下了一个统计数字，而对记录和验证实验结果很重要的培养平板表面菌落生长状况却因为平板的洗掉而无法保存。 迅数科技全自动菌落计数分析仪采用菌落放大图象拍摄，高分辨率CCD数字成像技术和迅数专利Colonfast菌落图象智能识别技术；将平板上所有菌落的智能识别、自动标记和累加计数一次性完成；仪器快速完成包含细菌、霉菌、酵母菌等样品的倾注、涂布、滤膜等各类平板的菌落自动计数和菌落形态分析，同时保存高清晰微生物菌落图片。 Colonfast菌落图象智能识别技术：将菌落置于全封闭的暗视野内，利用光学原理计算出符合一定角度的光，通过折射、衍射和反射的效果，对菌落形成极其清晰的空间立体影像由针对图像特点多通道分割色彩被作为图像处理中识别对象的感知特征基于HSV各向异性扩散和加性分裂算子的多通道分割技术。这一分割技术，建立在四维空间基础上，并能根据被检测对象的色彩特征进行自适应调整，加上被检测对象的形状特征，实现在多维空间的分割，分割精度大大提高。对一些原来难以分析统计的对象，如霉菌、深层菌落等，都实现了识别。  蓝白斑筛选是根据载体的遗传特征筛选重组子，如α-互补、抗生素基因等。现在使用的许多载体都带有一个大肠杆菌的DNA的短区段，其中有β-半乳糖苷酶基因（lacZ）的调控序列和前146个氨基酸的编码信息。在这个编码区中插入了一个多克隆位点（MCS），它并不破坏读框，但可使少数几个氨基酸插入到β-半乳糖苷酶的氨基端而不影响功能，这种载体适用于可编码β-半乳糖苷酶C端部分序列的宿主细胞。因此，宿主和质粒编码的片段虽都没有酶活性，但它们同时存在时，可形成具有酶学活性的蛋白质。这样，lacZ基因在缺少近操纵基因区段的宿主细胞与带有完整近操纵基因区段的质粒之间实现了互补，称为α-互补。由α-互补而产生的LacZ+细菌在诱导剂IPTG的作用下，在生色底物X-Gal存在时产生蓝色菌落，因而易于识别。然而，当外源DNA插入到质粒的多克隆位点后，几乎不可避免地导致无α-互补能力的氨基端片段，使得带有重组质粒的细菌形成白色菌落。这种重组子的筛选，又称为蓝白斑筛选。如用蓝白斑筛选则经连接产物转化的钙化菌平板37℃温箱倒置培养12-16hr后，有重组质粒的细菌形成白色菌落。 抑菌圈测量 抑菌圈测量是微生物分析的经典方法。它是利用抑菌物质在涂布特定试验菌的琼脂培养基内成球形立体状扩散，抑制试验菌的繁殖，在抑菌物质的周围形成透明圈，即抑菌圈。?抑菌圈1ml培养液中含侵染性的噬菌体粒子数。一般一个噬菌体形成一个噬菌斑，故可根据一定体积的噬菌体培养液所出现的噬菌斑形成单位（plaque-forming unit ，PFU），计算出噬菌体的效价。 噬菌斑（Plaque）：将少量噬菌体与大量宿主细胞混合后，将此混合液与45℃左右的琼脂培养基在培养皿中充分混匀，铺平后培养。当一个噬菌体侵染一个敏感细胞后，不久即释放出一群子代噬菌体，它们通过琼脂层的扩散又侵染周围的宿主细胞，并又引起它们裂解，如此经过多次重复经数小时至10余小时后，在平板表面布满宿主细胞的菌苔上，肉眼就可看到的一个个透亮不长菌的小圆斑，这就是噬菌斑。 由此可见，噬菌斑的形成与细菌菌落的形成有点相似，所不同的只是噬菌斑甚像一个“负菌落”。迅数