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FCM在诊断B淋巴细胞增殖性 疾病中的应用 安徽省立医院中心实验室 FCM检测的基本原理 FCM与病理的相同、 相异之处 FCM检测B细胞淋巴瘤 一、FCM检测的基本原理 FSC (forward scatter) ：前向散射光 与细胞大小、表面积相关 SSC （side scatter ）：侧向散射光 反应细胞的颗粒性、结构复杂性 FSC小 SSC小 FSC小到 中等， SSC大 FSC大 SSC大 适合做流式检测的标本 血液 骨髓 各种体液：脑脊液、胸腔积液、腹 腔积液 活检组织 新鲜标本置于NS或PBS 细针穿刺物 中，不能加固定液！！ 二、流式与病理的相同相异之处 相同之处  使用同一诊断标准  根据抗体表达情况判断细胞性质使用相似 抗体 CD分子：CD1-CD363，其中还有很大亚类 非CD分子：如bcl-2,bcl-6,ki 67等，数百种  各种标本均适合 血液、体液、组织、培养细胞等所有有活 细胞的标本，均可做流式 不同之处流式特点  抗体多、特异性好定性准确（明确系别、 阶段和良恶性）  快速获取大量细胞，使用目的抗原设门 擅长检测比例低（0.01%）、数量少、多种肿 瘤细胞并存的情况  没有组织结构：对于没有特殊标志的肿瘤， 亚型判断困难 三、FCM在诊断B淋巴细胞增殖性 疾病中的应用 B淋巴细胞增殖性疾病（B-CLPD ） 原发白血病：  慢性淋巴细胞白血病（CLL ）  B幼淋细胞白血病(B-PLL)  毛细胞白血病(HCL)  脾B细胞淋巴瘤/ 白血病，不能分类，包括毛细胞白血病 -变异型（HCL-V ） 淋巴瘤白血病期:  脾边缘区淋巴瘤(SMZL)  套细胞淋巴瘤(MCL)  滤泡淋巴瘤(FL)  淋巴浆细胞淋巴瘤/华氏巨球蛋白血症(LPL/WM) B-CLPD共同特征  临床特点： 中老年 临床进展缓慢，低度恶性（MCL除外） 可向侵袭性恶性淋巴瘤转化 治疗后可缓解，但难以治愈  形态学： 成熟小淋巴细胞为主，部分可出现中等大小淋巴细胞  免疫表型: 表达B细胞相关抗原和免疫球蛋白单一轻链  基因重排： 免疫球蛋白重链（IgH ）或/和轻链（IgL ）基因重排 淋巴瘤的诊断方法 细胞遗传学/ FISH 形态学 分子生物学 病理与免疫组化 流式细胞术 FCM确立恶性细胞的依据 成熟淋巴细胞的单克隆性: B细胞单克隆的胞膜Ig轻链 浆细胞单克隆的胞浆Ig轻链 NK细胞的KIR T细胞的TCR Vbeta 免疫球蛋白轻链限制性：  单克隆B细胞  Kappa: Lambda＜0.3:1或＞1:3  成熟B细胞不表达膜免疫球蛋白  多克隆正常B可能会掩盖少量单克隆性B细 胞  精确设门很重要  单克隆≠肿瘤 淋巴瘤与白血病免疫分型不同之处 白血病 淋巴瘤 累及骨髓比例 ﹥20% 0.01%～90% 同系疾病 表达相似 表达差别大 亚型 少 多 设门