实验七 果蝇唾液腺染色体的制备教程文件.ppt

实 验 七 果蝇唾腺染色体标本的制作和观察 ;一、 实验目的 观察果蝇的唾腺染色体，练习果蝇幼虫唾腺分离技术及唾腺染色体的制片方法。 ;二、 实验原理 果蝇幼虫唾腺的染色体比其他细胞染色体大200多倍。 核内重复有丝分裂后的众多染色线没有分开形成的多线染色体，一条染色体内含有染色体线多达千条以上。 多线染色体永久性处于前期体细胞染色体配对形式。普遍存在于双翅目昆虫某些物种的幼虫唾腺细胞内，是研究唾腺染色体常用的材料。;三、 实验材料 果蝇三龄幼虫 解剖镜 显微镜 镊子 解剖针 载玻片 盖玻片 吸水纸 生理盐水 醋酸洋红 ;培养果蝇3龄幼虫的培养基配方： 琼脂粉 6.5g 玉米粉 55g 白砂糖 40g 酵母粉 7g 丙酸 1.6ml 15%苯甲酸乙醇液 1.6ml 水 1000ml; 四、 实验步骤 1、幼虫培养： 置于16-18℃下饲养，当幼虫爬上瓶壁准备化蛹前，即为三龄幼虫，此时虫体肥大，便于解剖，是制备唾腺染色体的最理想时期。;2、幼虫的解剖 将载玻片置于解剖镜下，滴一滴生理盐水。将幼虫置于生理盐水内，一手持解剖针按住幼虫前端的1/3处，固定幼虫。另一手持针揿住幼虫头部正中，用力向前拉，把头部从身体拉开，腺体即随之而出。 唾腺为半透明小囊状，其上附有脂肪带，食道两侧各一个。找到唾腺后尽可能把腺体上的脂肪剔除。;;3、染色前处理 清除残体，使载片上只留下唾腺。 4、酸解： 把腺体放入1N HCl中浸泡2-3分钟，dH2O洗3次。 5、染色 滴上几滴醋酸洋红于唾腺上，染色30分钟。 6、压片 在载片上加盖玻片，盖片上覆盖一吸水纸，然后以拇指适当用力压片，要求将唾腺细胞核压破，染色体伸展开来而不破碎为好。;7、显微镜下观察 压好的玻片标本，用显微镜可以看到四对染色体，第一对染色体（X-）组成一个长条，第二和第三对各自组成了具有左右两臂的染色体对，它们都以中部的着丝区聚集，而第四对染色体很小，分布在着丝区呈点状或盘状。这样，从压好的较为模式的片子中便可看到五条弯曲展开的染色体臂（X-、ⅡL、ⅡR、ⅢL、ⅢR），和一个点状的第四染色体对，它们在着丝区构成染色中心并向四周伸开。 ;;;8、永久片的制作 ① 使盖片向下放入盛有45%醋酸+95%酒精（1：1） 的培养皿中。一端垫上一玻棒，使玻片稍为倾 斜，约过5—10分钟，可见盖片与载片分离。用 镊子轻轻取出盖片于吸水纸上。 ② 有材料的一面向上，放入盛有95%酒精+叔丁醇 （1：1）的培养皿中三分钟。 ③ 换入纯叔丁醇中三分钟 ④ 用中性树胶封片 ;冷冻脱片封片法： ① 将制片直接冰冻于-20冰箱冷冻； ② 用刀片将冻硬的盖玻片与载玻片分离； ③ 将盖片和载片置约37℃左右的温箱中烘干； ④ 二甲苯中浸泡10-20分钟，中性树胶封片，风干、 镜检。 ★ 此法最为简便，适合于某些材料易脱落的制片。 ;五、实验报告 1. 绘制你所看到的清晰的唾腺染色体图像。 2. 交一张含有清晰唾腺染色体的制片。 3. 总结讨论获得理想制片的要点。 ;Thanks!