心血管药理学的研究方法 课件.ppt

◎ 普通饲料喂养时，成年鼠血清胆固醇水平是正常鼠的5～8 倍。 ◎ 当给予高脂负荷饲料(20 %脂肪，0.3 %胆固醇后) ，血清中胆固醇浓度可达普通饲料喂养升高值的4～5 倍。 ◎ 血脂升高稳定。 ◎ 遗传背景为C57BL/6品系。 ◎ 繁殖能力较强。 apoE-/-小鼠 ◎ 行动灵敏，易发生逃逸。 ◎ 性情较其他品系小鼠急，抓持不当易被咬伤。 ◎ 成年雄鼠之间易发生撕咬。 apoE-/-小鼠 ◎ 较好地反映人类胆固醇代谢的调节。如肝脏合成胆固醇的比例，人内源性胆固醇约有90%是肝外组织合成的，雄性金黄地鼠肝外合成比例约为85%，而雌性大鼠只有35%是肝外合成、雌性小鼠只有55%在肝外合成。 ◎ 较低的高脂负荷即可建立理想的动物模型。饲料中胆固醇含为0.2%即可成功造模。大鼠饲料中胆固醇的含量多为1-2%，超过自身合成量的10倍， 且要在饲料中加入胆汁酸盐才有能达到理想的血脂水平。 ◎ 建立高脂血症模型所需时间短。喂饲高脂饲料后3-4周，血TC、TG 可达较为稳定的水平。 金黄地鼠(hamster) 降脂中药的药理学研究(一) ◎ 脂质含量及酶的测定 a. 血脂含量的测定 血清总胆固醇(TC) 血清甘油三酯(TG) 血清低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C) 血清高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C) b. 血清酶活性测定 羟甲基戊二酰CoA(HGM-CoA)还原酶 肝脂酶(HL) 脂蛋白脂酶(LPL) 卵磷脂胆固醇酯酰转移酶（LCAT） ◎ 载脂蛋白含量的测定 apoAI apoB apoC ◎ LDLR活性测定 放射性配基法 酶联免疫吸附法 激光共聚焦显微镜测定法 ◎ LDLR基因表达 降脂中药的药理学研究(二) ● 动脉粥样硬化的研究 与动脉粥样硬化形成有关的细胞和分子 Fatty-Streak Formation in Atherosclerosis Endothelial Dysfunction in Atherosclerosis Unstable Fibrous Plaques in Atherosclerosis Formation of an Advanced, Complicated Lesion of Atherosclerosis ApoE Knockout Mice 0 6 12 18 wks of age High Fat 0.3% Cholesterol T-Chol 1500-1800 mg/dl Normal Chow T-Chol 500-700 mg/dl Atherosclerotic Lesion 抗动脉硬化中药的药理学研究(一) ◎ 血脂的测定 ◎ 病理形态学研究 制作主动脉弓病理切片 染色及斑块面积的测定，测定斑块面积用imagepro plus软件 ◎ 分子病理学研究 通过免疫组织化学，用特定的抗体检测斑块组织中相关分子的表达 抗动脉硬化中药的药理学研究(二) ◎ 分子生物学研究 巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)及其受体c-fms的基因表达 血小板来源的生长因子(PDGF)受体的基因表达 凝集素样氧化低密度脂蛋白受体(LOX-1)的基因表达 趋化因子(cxcl16、MCP-1及其受体CCR2等) ● 血管再狭窄的研究 动物模型 三种小鼠血管再狭窄模型 ◎ 塑料微导管损伤模型（Cuff 植入模型） ◎ 金属丝颈动脉损伤模型 ◎ 金属直弹簧丝股动脉损伤模型 塑料微导管损伤模型 金属丝颈动脉损伤模型 (据Lindner医师等所著论文的图例部分引用） 金属直弹簧丝股动脉损伤模型 （据Sada医师等所著论文引用） C57BL/6 Mice (Recipient) BM cells=5X105 Bone Marrow Transplantation GFP+/LDLR -/- Mice (Donor) Irradiation (9Gy) ① ② Polyethylene Cuff Sham Operation Left Femoral Artery Right Femoral Artery Mouse Vascular Injury Model Cuff Placement 少见原因引起的颅内静脉窦血栓形成课件突发心跳呼吸骤停抢救应急演练课件小学英语教学法英语教学原则阻滞剂在减低非心脏手术 少见