神经母细胞瘤与fish检测 课件.ppt

southern印迹杂交 page11 聚合酶链式反应-杂合型缺失（PCR-LOH） 原理： 通过PCR扩增DNA某多态位点来确定该位点的杂合 性缺失（Loss of Heterozygosity）即PCR-LOH. page12 检测方法比较 检测方法 优点 缺点 RT-PCR 快速，灵敏度高，结果可靠 易污染，RNA提取难度大且易降解 southern blot 快速，灵敏，精确的给基因定位 步骤繁琐，组织用量大，常有同位素污染，衰变，价格也比较昂贵 PCR-LOH 简单，快速，样本需求量少 染色体缺失最常发的区段必须有已知的多态位点 page13 FISH - Fluorescence In Situ Hybridization 一项快速、准确、高灵敏度的细胞分子生物学技术 在恶性肿瘤相关基因/染色体区域的大片段缺失、扩增、转位等方面具有重要诊断价值 是常规分子诊断技术的重要补充 page14 FISH 技术原理 荧光原位杂交 Fluorescence In Situ Hybridization 原理 采用体外荧光标记的DNA探针，利用探针与被检测的目的基因碱基互补配对的原则，探针与目的基因经高温变性杂交后，通过荧光显微镜检测荧光信号而得出结果，从而检测细胞，组织样本中的染色体或基因异常。 page15 FISH 技术原理 page16 NB中FISH检测的靶点 SRD基因缺失检测探针 MYCN基因扩增检测探针 page17 MDM4基因扩增检测探针 MLL基因检测探针 page18 NB中FISH检测的靶点 1p缺失 Ⅲ、Ⅳ期NB中80％～100％有1p缺失,与临床预后差、生存期 短相关,是NB的特征基因改变之一. 1p36的缺失一般都是杂合型缺失（LOH）. 1p缺失的主要区段发生在1p36.3,它的缺失是NB易复发的 因素之一,1p36区上含有肿瘤抑制因子CHD5. J Natl Cancer Inst 2008;100:940–949 Oncogene (2005) 24,2684–2694 page19 1p36.3缺失（FISH阳性） 荧光原位杂交 (FISH)检测1p36.3缺失 ——SRD基因缺失检测试剂盒 正常型 （FISH阴性） page20 MYCN基因 定位于2号染色体2p24区段的原癌基因. 25%以上的NB患者出现MYCN基因扩增. MYCN基因扩增和过度表达与NB的浸润,转移和不良预后密切相关, MYCN基因拷贝数增多在NB中较早期（I、II、IVS期）多见. MYCN基因扩增每单倍基因组大于10个拷贝被认为是预后不良的标志. page21 陈霞静．儿童神经母细胞瘤36例诊断分析．右江民族医学院学报，2003，25(2)：225-226． Clin Cancer Res 2009;15:2085-2090 page22 FISH检测结果中：MYCN基因的扩增形式有两种 一种在均质染色区扩增（HSR） 一种是双微体扩增（DMs） 荧光原位杂交 (FISH)检测MYCN扩增 ——MYCN基因扩增检测试剂盒 page23 Neoplasia●Vol.3,No.2,2001,pp.105-109 FISH阳性的检测结果 FISH阳性（DMs） FISH阳性（HSR） page24 FISH阳性判断标准 红色众多信号连接成簇（扩增表现为均质染色区） 红色信号出现双微体扩增 红绿信号比＞1.5 page25 少见原因引起的颅内静脉窦血栓形成课件突发心跳呼吸骤停抢救应急演练课件小学英语教学法英语教学原则阻滞剂在减低非心脏手术 少见原因引起的颅内静脉窦血栓形成课件突发心跳呼吸骤停抢救应急演练课件小学英语教学法英语教学原则阻滞剂在减低非心脏手术 少见原因引起的颅内静脉窦血栓形成课件突发心跳呼吸骤停抢救应急演练课件小学英语教学法英语教学原则阻滞剂在减低非心脏手术 少见原因引起的颅内静脉窦血栓形成课件突发心跳呼吸骤停抢救应急演练课件小学英语教学法英语教学原则阻滞剂在减低非心脏手术 少见原因引起的颅内静脉窦血栓形成课件突发心跳呼吸骤停抢救应急演练课件小学英语教学法英语教学原则阻滞剂在减低非心脏手术 少见原因引起的颅内静脉窦血栓形成课件突发心跳呼吸骤停抢救应急演练课件小学英语教学法英语教学原则阻滞剂在减低非心脏手术 少见原因引起的颅内静脉窦血栓形成课件突发心跳呼吸骤停抢救应急演练课件小学英语教学法英语教学原则阻滞剂在减低非心脏手术 少见原因引起的颅内静脉窦血栓形成课件突发心跳呼吸骤停抢救应急演练课件小学英语教学法英语教学原则阻滞剂在减低非心脏手术 少见原因引起的颅内静脉窦血栓形成课件突发心跳呼吸骤停抢救应急