Chapter 6 DNA recombination知识讲稿.ppt

Chapter 6 DNA recombination;;第一节 同源重组 ;;;二、Holiday重组模型;3、游离端交叉连接，形成Holliday 结构;6、垂直切割导致重组发生 ?;7、水平切割不会导致重组，而产生两段短的杂合链;三、细菌的同源重组;（1）RecA: 促进单链同化或单链吸收?;单链同化发生的三个条件 其中一个DNA必须存在单链区 其中一个DNA必须有一个自由3’末端 此单链区和3’末端必须位于两分子之间互补的区域内;RecA 包裹的ssDNA 入侵双螺旋DNA;（2）RecBCD 复合体 三种酶的活性： 核酸酶；解旋酶；ATPase 作用： 在Chi位点处产生含3’游离未端单链.;Chi位点---RecBCD识别的靶位点 5 GCTGGTGG 3 3 CGACCACC 5 是重组频率较高的部位 E.coli中每隔约5~10 kb有一个拷贝;（3）RuvAB 复合体: 促进分支迁移;;2、细菌DNA同源重组的过程;(d) RecA帮助入侵单链寻找同源序列. (e) 切割; 单链交换 (f) 连接酶封闭切口, 产生 Holliday 结构;(g) 在RuvA 和RuvB 作用下发生分支迁移. (h) RuvC 使Holliday结构解离;第二节 位点特异性重组;（二）通过位点特异性重组实现两种类型间的转换 λDNA整合到宿主DNA →进入溶源状态 λDNA从宿主DNA 中切离 →进入裂解状态 （三）催化重组的酶 1、整合酶 Int (integrase)：类似拓扑异构酶活性 2、整合宿主因子（IHF，integration host factor ） 3、切除酶（excisionase） （四）重组位点： 附着位点（attachment site） attP（ POP’）和attB（ BOB’）有15bp核心序列配对;（五）重组过程： 整合：POP’ + BOB’ →BOP’—POB’ 切离：BOP’—POB’ → POP’ + BOB’ ;第三节 转座;二、转座子发现： McClintock B： 1938年，提出转座基因概念 1944-1950，阐明“Ds-Ac调控系统” 1983年，获诺贝尔生理医学奖;三、转座子的基本结构特点 1、自身携带有转座酶基因 2、末端有反向重复序列（IR） 3、转座后两端有正向重复序列（DR）;四、转座子的类型;ATGCA TACGT 2、Tn （复合转座子, composite transposons） 特点： （1） 2-10kb;; （2）两端有两个相同或高度同源IS序列 （3）含转座酶基因 / 抗???素抗性基因;ISL;3、TnA （TnA family） 特点： （1）5~25kb; （2）两端IR（30~40bp）相似或相同；两端无IS组件; （3）转座酶基因 / 解离酶基因 / 抗生素抗性基因 （4）Res位点：与共整合体的解离有关 ;（二）真核生物转座子;（一）转座相关的酶 1、转座酶: （1）识别转座子的两端序列和受体DNA的靶序列 （2）切割使转座子从供体DNA中释放出来 （3）在靶位点上作出交错的切割(类似限制酶) （4）催化一对转酯反应，使转座子3’端与靶位 点相连 2、解离酶: （1）TnA家族转座必须 （2）催化两个转座子拷贝间的位点特异性重组;;（二）非复制型转座;1、非复制型转座定义 转座子作为一个可移动的单位直接被移位，留下一个断裂的供体位点。 2、非复制型转座过程 （1）转座酶使转座子从供体DNA中释放出来； 转座酶使受体DNA靶位点形成交错切口； （2）转座子插入交错切口(转座酶--转酯反应) ， （3）连接并修复缺口单链，受体DNA产生同向重复序列。; （三）复制型转座 1、定义：整个转座子被复制，所移动和转位的仅 仅是原转座子的拷贝。;4;2、复制型转座过程： （1）转座酶使转座子和受体DNA双链形成交错切口； （2）转座子两端形成复制叉，复制、连接补齐缺口， 形成共整合体； （3）重组 (解离酶)，拆分共整合体； （4）受体DNA产生同向复序列。 ;