蛋白质的分离纯化1演示教学.pptVIP

高级生物化学——蛋白质的分离纯化（I）;蛋白质的背景介绍 2. 蛋白质分离、纯化的目的 3. 蛋白质(粗)分离: (I)从细胞和组织——天然蛋白的提取 (II)表达蛋白的提取 4. 蛋白质的纯化－色谱(液相) Chromatography;1. 背景介绍;1.1 蛋白质（Proteins）;蛋白可以折叠为一特定的形状或者保持一定的柔性。 多数蛋白的密度在1.3－1.4g/cm3 细胞经常添加磷酸基团,糖基及酰基等到侧链上以改变蛋白的形状及活性。 ;2. 蛋白质分离、纯化的目的;3. 蛋白质分离、纯化方法;策 略;从哪儿开始?;cDNA克隆（为目前蛋白来源的主要方法，但是蛋白易形成包涵体（inclusion body）） 重组蛋白基因在大肠杆菌， 昆虫细胞， 哺乳动物细胞或植物细胞中表达。 也用差速离心及色谱方法纯化。 在重组的蛋白中可以添加‘Tags’以便于纯化。;3.1 蛋白质粗分离:(I)从细胞和组织——提 取 ; 哪个物种合适？ 丰度及活力特点 大小，成本及物种的可获得状况 哪个组织合适? 对于特定的细胞哪个组织丰富 组织中哪种细胞中有这类蛋白 纯化过程中的作为应该与特定的方案相关 非常有益的信息 大小 组成;有关组织提取的影响因素;pH值;一般地，纯化过程中的pH值要远离其等电点pI的稳定范围内 酸性的蛋白 pH 7可溶; 碱性蛋白组pH