13看第十三章节 植物细胞的遗传转化.pptVIP

2、根癌农杆菌Ti质粒转化的基本程序 （1）受体系统的建立 （2）Ti质粒转化载体的构建 （3）目的基因的转化与鉴定 目的基因的转化程序 根癌农杆菌的培养、纯化、保存 Vir区基因的活化和工程菌液的制备 外植体的预培养、接种及与农杆菌的共培养 外植体脱菌及选择培养 转化体的选择和植株再生 转基因植株的鉴定 叶盘转化法 打孔器从消毒叶片上获得叶盘 在工程菌液中浸数秒 培养基上共培养2~3天 在含有抑菌剂的培养基上培养 转化体选择和再生 不同作物适宜的接种时间和接种菌液浓度* 外植体种类 接种时间/min 接种菌液浓度/OD 共培养时间（d） 小麦未成熟胚和胚性愈伤组织 60 0.5～1.0 2～3 水稻胚性愈伤组织 15 1.0～1.5 2 玉米未成熟胚 10 1.0 2～3 棉花下胚轴 1～3 0.3～0.6 2 大豆子叶 10～30 0.3～0.6 2 原生质体共培养转化法