17-核酸的物理化学性质和常用的研究分析方法.pptVIP

七、DNA测序 早期的测序大部分从化学方法出发，其中很多的概念和技术在DNA测序史上占有重要地位 最早的测序方法简单，只能测定较小的片段。上世纪70年代 Maxam 和Gilbert发展了一种碱基顺序快速分析法，不久，Sanger利用全新的概念提出了一个新的测序方法(酶法)，DNA的测序才真正成为可能 * 七、DNA测序 化学法 Maxam-Gilbert 酶法 Sanger PAGE 40cm 100-200个核苷酸 * 七、DNA测序 1975年，Sanger发展了一种新的序列测定方法，通过对互补链合成的控制了解序列信息。链终止法利用2’,3’- ddNTP来终止链的延伸 * 2’,3’- ddNTP 可以测定更长的序列可以实现自动化 七、DNA测序 利用待测DNA单链作模板，在DNA聚合酶催化下，以四种脱氧核糖核苷三磷酸为原料，在Mg2＋存在下，在引物作用下随机合成DNA片断，再利用2’,3’- ddNTP使DNA合成终止于某一特定的碱基，可以得到末端终止于某特定碱基的各种不同长度的DNA片段，最后进行电泳和放射自显影 原理 * 七、DNA测序 方法 待测DNA dNTP