005 动物细胞原代培养.pptVIP

1、进一步了解动物组织细胞培养条件与设施 2、掌握动物细胞原代培养方法 3、熟悉无菌操作的步骤 将动物机体的各种组织从机体中取出，经各种酶（常用胰蛋白酶）、螯合剂（常用EDTA）或机械方法处理，分散成单细胞，置合适的培养基中培养，使细胞得以生存、生长和繁殖，这一过程称原代培养。 器材：二氧化碳培养箱（调整至37℃），培养瓶、青霉素瓶、100目不锈钢滤网、平皿、吸管、移液管、纱布、手术器械、血球计数板、离心机、水浴箱（37℃） 材料：胎鼠或新生鼠 试剂：1640培养基（含20%小牛血清），0.25%胰酶，Hank’s液（或PBS），碘酒。 （一）胰酶消化细胞培养 1、取材：将孕鼠或新生小鼠拉颈椎致死，置75%酒精泡5秒钟（时间不能过长、以免酒精从口和肛门浸入体内）入超净台内（或将新生小鼠在超净台内）置平皿中，解剖取肝脏（肾脏、心脏）。 2、用PBS液洗涤三次，并剔除脂肪，结缔组织，血液等杂物。 3、用手术剪将肝脏（肾脏、心脏）剪成小块（1mm2），再用PBS液洗三次，转移至离心管中。 4、视组织块量加入5—6倍的0.25%胰酶液，37℃中消化40分钟，每隔5分钟振荡一次，或用吸管吹打一次，使细胞分离。 5、加入3—5ml培养液（或血清）以终止胰酶消化作用（或加入胰酶抑制剂）。 6、100目滤网过滤，取悬液加入到离心管中。 7、1000rpm，离心10分钟，弃上清液。 8、加入P