流式细胞术的发展和细胞组学新技术.ppt

流式细胞术发展和细胞组学新技术 游东生 美国贝克曼库尔特公司上海 流式细胞仪新技术趋势 Multi-color Analysis Red sensitive PMTs Excellent Sensitivity New optics layout for Sharpness Multi-platform sampling and humanity devices Auto Setup with biological sample Off-line compensation, LMD compensation and More FCS 3.0 format for Listmode files Solvent protein detection development (beads based assay) Multi-Laser, multi-power options for different use Large and Small particle sorting New technologies for high yield, high purity and high viability sorting 。。。 32 支试管自动上样盘（MCL) Walkaway 独立获取样本，减轻操作劳动 MCL 自动模式. MCL 手工模式. 单管上样模式. 暂停/转动功能可以方便地往试管加入刺激剂或终止剂进行试验 每支试管检测前单独震动混匀，有利于均匀获取细胞 FC500 MPL 24 孔 0.5 – 2.5 ml 每孔容量 96 标准孔和深孔反应板 250 ul 最小容量 40 支试管 (12x75mm) 1ml 最小体积 可以固定体积上样检测 175 ul 吸样量 从模拟信号到先进的数字化信号 数字化信号转换 对数查表保证最优化的线性和稳定性 4次幂转换误差 1% 光纤通讯 速度快 保真性高 实时获取数据和分析报告结果 20比特的数据，补偿数字化 全矩阵正反补偿 离线补偿 从相邻相邻相减到减法全矩阵到正反全矩阵数字化补偿方法 自动设置功能－实时自动补偿 每个通道电压自动调整 2-5 色全自动补偿 以细胞而不是微球进行自动荧光交叉和重叠的计算 可以根据不同的应用而分别设置 利用20比特的数据进行数字化补偿－实时手工补偿 全矩阵正反补偿 20比特未补偿的原始数据能提供LMD结果直接补偿 获取后通过滑调调节迅速重新补偿 20比特未补偿或补偿不好的原始数据可重新离线补偿 在相同电压条件下进行自动设置生成相应的补偿文件 利用补偿文件进行LMD结果的重新播放 可以进行单个文件和批处理文件的重新补偿 离线补偿后得到的补偿文件应用于LMD文件进行重新补偿 从其它系统到Windows 系统 多种方式的图形重叠 点击将结果输出至WORD,PPT文件 点击将结果直接以EXCEL结果输出 点击将结果直接以PDF格式输出 FCS 3.0文件包含20比特的原始数据，10比特获取时经过补偿的数据和获取时的方案 可以直接以LMD结果文件来获取新的样本 分析时不须预先打开方案，而可以直接打开LMD结果文件进行分析 可以重新进行补偿 ECV FS Quanta 是目前市场上分析精度最高的分析工具，能用的染料最多，并且能同时得到细胞大小的精确信息 多色分析离我们越来越近 越来越多的细胞缺乏特异性标记，需要越来越多的标记来限定。多色分析的优势是21+1, 32+1, 31+1+1, ETC.. 节省试剂和工作量。如果做非常全面的免疫分型，三色需要20支试管，四色需要12支，而五色只需要6支。 越来越多的生命活动研究需要多参数多角度分析，例如凋亡，AICD等。 抗原特异性T细胞分析 四聚体（tetramer)染色 细胞因子分泌试验 ELISPOT Cytokine Secretion Assay 不同厂家的MHC四聚体产品不太一样：贝克曼库尔特公司创造性地构建和表达了MHC分子α3链的区域突变的蛋白（iTAg），能降低其与非特异性T细胞结合，大大提高了特异性。并且将MHC四聚体直接标记荧光，和常用的抗原多肽负载后整体商品化，也有单独的MHC分子（iTAg）单独出售，极大方便了研究者 利于此技术关键问题在四聚体制备，最大的问题不是没有阳性细胞，而是阳性率太高 Beckman Coulter已经有的部分产品 传染性疾病相关： HIV gag – SLYNTVATL [HLA - A*0201] HIV pol – ILKEPVHGV [HLA - A*0201] CMV PP65 – NLVPMVATV [HLA - A*0201] EBV – GLCTLVA