吸附法精品.ppt

赤霉素也可用XAD－2吸附，但泄漏过早（即很快就有赤霉素从柱中漏出），故应将流速降低，使接触时间增长，或加入盐，可改善吸附性能。由图可见，在合适的条件下，可吸附10倍量的溶液（泄漏为吸附时）。 例如： 例如： 大环内酯类抗生素可在碱性条件下吸附在XAD-2上，然后用有机溶剂洗脱。 同样，XAD－2可吸附生物活性物质，XAD－7可吸附有机酸。 例如： 用于污水处理，如含酚含氯、含硝基化合物废水处理，造纸印染、洗涤剂废水等的处理； 做色谱法的载体，分析痕量物质； 作为野外采样保存剂； 食品工业上做糖浆脱色剂。 此外，在医疗化验和治疗等方面都有广泛应用。 大网格吸附剂的其他用途： 三、其他类型的吸附 目前，吸附过程的应用正在扩大，特别是在蛋白质分离中占有主导地位，并出现了许多以新的吸附原理为基础的色谱分离技术。 （一）疏水作用吸附 概念：利用溶质和吸附剂表面之间弱的疏水性相互作用而被吸附的过程称为疏水作用吸附。 原理：疏水作用的强度随盐浓度的增加而增加。高盐浓度下，蛋白质被惰性基质上的疏水基团所吸附，而当淋洗液的离子浓度逐渐降低时，蛋白质样品则按其疏水特性被依次洗脱下来，疏水性越强洗脱时间越长。 （二）盐析吸附 原理：这类吸附剂是由疏水吸附和盐析沉淀组合而成的。首先添加“硫酸铵－蛋白质”悬浮液到被吸附柱中，然后用递减的盐浓度梯度展开，达到分离产物的目的。 吸附柱可以是纤维素或葡聚糖和琼脂糖，使用前采用硫酸铵预平衡。 （三）亲和吸附 亲和吸附分离是利用溶质和吸附剂之间特殊的化学作用，从而实现分离。 吸附剂由载体和配位体组成 亲和吸附的特点 效率高：利用亲和吸附可以从粗提液中一次性分离得到高纯度的活性物质。 分离精度高：可用于分离含量极低，结构相近的化合物 但通用性较差，洗脱条件苛刻 亲和吸附载体的种类 种类 组成 性能 多孔玻璃载体 硅酸盐 坚硬、耐酸碱、易修饰 聚丙烯酰胺 凝胶载体 丙烯酰胺 N,N-亚甲基双丙烯酰胺 亲水性好 可供活化基团多 纤维素载体 多糖类物质 来源丰富，但非特异性吸附及空间位阻强，对分离不利 葡聚糖凝胶载体 经环氧丙烷交联的多糖类 理化性质稳定， 但粒径太小 载体的活化和偶联 亲和吸附的载体通常是惰性的，往往不能直接与配基连接，偶联前需要先活化，活化的方法主要有： 溴化氰活化法：琼脂糖、葡聚糖引入亚氨基碳酸盐； 高碘酸活化法：氧化多糖，生成烷基胺 环氧化法：多糖类载体与环氧氯丙烷作用生成环氧化合物，再与氨基偶联； 甲苯磺酰氯法：参见教材p145 双功能试剂法 二乙烯砜 影响亲和吸附的因素 配基浓度： 配基浓度高有利； 空间位阻： 加入“手臂链”以降低空间位阻的影响； 配基与载体的结合位点： 就蛋白质等大分子作为配基时，与载体连接的键越少越好； 载体孔径：孔道大小； 微环境：载体或“手臂链”的极性、电性； 概念：当亲和吸附剂中配基是三嗪染料时，它对许多蛋白质有识别作用，这种吸附过程称为染料配位体吸附。 （四）染料配位体吸附 原理： 三嗪染料是多环芳香族的磺化物，含有三 反应基团，与基质的连接很容易，并有很多官能团可同蛋白质发生作用，其中包括离子交换、疏水和电荷转换等。 染料与蛋白质表面残基上的电荷和疏水性差别等综合因素造成蛋白质对染料的选择性吸附。 染料 配位体吸附作用与基质的特性，染料的结构以及染料的取代程度有关。 例如： 使用Ciaeron blue F3GA可对人血清白蛋白分离纯化。 （五）免疫吸附 概念：利用“抗原－抗体”的亲和反应来进行分离纯化的方法称为免疫吸附。 包括：单克隆和多克隆方法。 蛋白质的固定化抗体，能与蛋白质发生特异作用，而非单纯的配位体结合，故不同于亲和吸附剂。 抗体对氨基酸序列和三维结构非常专一，而且亲和力极强，因此，将抗原或抗体耦联到固相载体上，便可用来分离和纯化其互补的免疫物质。 特点： （六）固定金属亲和吸附 亲和吸附剂中，过渡金属（Fe2＋、Ni＋、Cu2＋、Zn2＋ ）与电子供给体（N、S、O）以配位键连接；用亚氨二乙酸类螯合剂与重金属离子作用，生成带有多个配位基的金属螯合物；这类螯合物在水溶液中与水分子高度溶剂化，具有活泼的羟基和由盐产生的活性基团。 这些金属螯合物上的配价位点就是生物分子的吸附位点，这些点在溶液中由溶剂分子或阴离子占据。 不同吸附位点的螯合物对蛋白