专题五课题1_DNA的粗提取以及鉴定.pptVIP

讨论：加入蒸馏水的目的？ 降低NaCl溶液浓度到使DNA溶解度最低点，使DNA从NaCl溶液中析出 将溶液中的DNA与其他杂质分离，这一步骤是实验成败的关键。实验中应该缓慢贴壁加入蒸馏水，并轻轻地沿一个方向不停地均匀搅拌，以利于DNA分子的附着和缠绕 注意事项： ④滤取含DNA的粘稠物 用放有多层纱布的漏斗，过滤步骤3中的溶液至 500mL的烧杯中，含 DNA的粘稠物被留在纱布上 ⑤将DNA的粘稠物再溶解 ⑥过滤含有DNA的氯化钠溶液 ⑦提取含杂质较少的DNA ⑤将DNA的粘稠物再溶解 取 1个 50 mL烧杯，向烧杯内注入氯化钠的物质的量浓度为 2 mol／L的溶液 20mL。用钝头镊子将纱布上的粘稠物夹至氯化钠溶液中，用玻璃棒不停地搅拌，使粘稠物尽可能多地溶解于溶液中 ⑥过滤含有DNA的氯化钠溶液 取1个100 mL烧杯，用放有两层纱布的漏斗过滤步骤5中的溶液。取其滤液，DNA溶于滤液中 ⑦提取含杂质较少的DNA 在上述滤过的溶液中，加入冷却的、酒精的体积分数为 95％的溶液 50mL（使用冷却的酒精，对DNA的凝集效果较佳），并用玻璃棒搅拌，溶液中会出现含杂质较少的丝状物。用玻璃棒将丝状物卷起，并用滤纸吸取上面的水分。这种丝状物的主要成分就是DNA 答：因为DNA不溶于冷酒精，而其他物质可以溶解在酒精中，使含杂质较少的DNA丝状物可以析出,悬浮于溶液中 讨论： （2）观察丝状物呈什么颜色？ 答：白色 （1）为什么要加50mL的冷酒精？ 取两支20 mL的试管，各加入氯化钠的物质的量浓度为0．015 mol／L（或者2mol/L）的溶液5 mL，将丝状物放入其中一支试管中，用玻璃棒搅拌，使丝状物溶解。然后，向两支试管中各加入4mlL的二苯胺试剂。混合均匀后，将试管置于沸水中加热 5 min，待试管冷却后，观察并且比较两支试管中溶液颜色的变化 ⑧ DNA的鉴定 讨论： 答：有丝状物的试管变成蓝色，另一试管还是原来颜色 （2）这一鉴定结果说明什么问题？ （1）比较两个试管中溶液的颜色有什么不同？ 答：提取出的丝状物是DNA （3） DNA的直径约为20×10-10 m，实验中出现的丝状物的粗细是否表示1个DNA分子直径的大小？ 答： DNA分子直径只有2 nm。丝状物是多个DNA子聚在一起形成的 ①提取鸡血细胞的细胞核物质(过滤) ②溶解DNA ③析出含DNA的粘稠物 ④滤取含DNA的粘稠物 ⑤将DNA的粘稠物再溶解 ⑥过滤含有DNA的氯化钠溶液 ⑦提取含杂质较少的DNA ⑧ DNA的鉴定 答：整个实验共“两次蒸馏水，三次过滤，两次析出，六次搅拌” 6、讨论： ①两次蒸馏水 第一次：细胞吸水胀破 第一步 第二次：使 DNA黏稠物析出 第三步 （1）此实验过程中有几次使用蒸馏水？几次过滤，几次析出，几次搅拌？分别在哪一步？ 过滤时使用的纱布层数与需用滤液或黏稠物有关，第二次要用其滤出的黏稠物有关，所以要使用多层纱布，第一次和第三次均要用其滤液，使用的纱布为2层 ②三次过滤 第一次： DNA存在于滤液里 第一步 第二次： DNA被留在纱布上 第四步第三次： DNA存在于滤液里 第六步 专题5 DNA和蛋白质技术 课题1 DNA的粗提取与鉴定 一、基础知识 （一）提取DNA的方法 1、提取生物大分子的基本思路 选用一定的物理或化学方法分离具有不同物理或化学性质的生物大分子 3、提取DNA的基本思路 利用DNA与RNA、蛋白质和脂质等在物理和化学性质方面的差异，提取DNA，去除其他成分 4、DNA的溶解性 DNA和蛋白质等其他成分在不同浓度的NaCl溶液中溶解度不同，利用这一特点，选择适当的盐浓度就能使DNA充分溶解，而使杂质沉淀，或者相反 5、讨论： ①根据DNA在NaCl溶液中的溶解度曲线图，思考在什么浓度下， DNA的溶解度最小？ DNA在NaCl溶液中的溶解度是如何变化的？ 在NaCl溶液浓度低于0.14 mol/L时，DNA的溶解度随NaCl溶液浓度的增加而逐渐降低；在0.14 mol/L时，DNA溶解度最小；当NaCl溶液浓度继续增加时，DNA的溶解度又逐渐增大。 当氯化钠的物质的量浓度为 2 mol／L时，DNA的溶解度最大，浓度为 0．14 mol／L时，DNA的溶解度最低。利用这一原理，可以使DNA在盐溶液中溶解或析出 ②如何通过控制NaCl溶液的浓度使DNA在盐溶液中溶解或析出？ DNA不溶于酒精溶液，但是细胞中的某些蛋白质则可以溶于酒精。利用这一原理，可以将DNA与蛋白质进一步分离 6、DNA在酒精溶液中的溶解性 7、DNA对酶、高温和洗涤剂的耐受性 ①蛋白酶能水解蛋白质，但是对DNA没有影响 ②大多数蛋白质不能忍受60－80