医学真菌生物膜研究进展精品.ppt

生物膜细胞的低生长率 在生物膜里，细胞的生长速度已经被认为是影响药物敏感性的一个重要调节因素。事实上，所有的抗生素对快速生长的细胞更有杀伤力。由于营养获得的限制，生物膜细胞处于缓慢生长状态，导致真菌的代谢降低，尤其是在生物膜的基层，因此表现出细胞对抗菌药物不敏感。 但这显然不能完全解释生物膜抵抗超出正常MIC数十甚至上千倍浓度的耐药性。 药物渗透率 生物膜确实有减缓药物渗透的作用。但在用念珠菌各菌种生物膜所做的实验中，加入药物3-6h后生物膜边缘的药物浓度已达到或超过MIC却不能杀死生物膜细胞。 包含白念珠菌和表皮葡萄球菌的混合生物膜中，药物渗透更缓慢。但是即使是这样，在生物膜边缘的药物浓度也常常超过MIC。 因此药物渗透不足并不是念珠菌生物膜主要的耐药机制。 流出泵 在游离条件下，白念珠菌抵抗唑类药物的主要机制之一是由ABC运载体*和主要辅助因子#介导的药物流出泵，即cdr1、cdr2和mdr1。研究表明，在生物膜中两类流出泵基因均过表达。 * ATP-binding cassette transporters， CDR基因编码 # major facilitator, MF，MDR基因编码 缺乏流出泵的菌株所形成的早期生物膜对氟康唑的敏感性大幅增加。但在生物膜逐渐成熟后，缺乏药物流出泵的菌株同样耐药。 因此，药物流出泵只在生物膜形成早期起作用。 用罗丹明(Rh123)流出检测分析流出泵的功能也证实了这一点，即在早期阶段，生物膜与游离细胞的Rh123保留量有较大差别，而在后期(12h、48h)则无。 耐药株的存在 有学者主张生物膜内存在着耐药的亚群，其生物学特性与普通菌细胞不同，由于耐药亚群的存在使得药物无法完全清除生物膜。 证据：早期白念珠菌生物膜中的真菌细胞存在着两种亚群，它们对洗必泰的敏感性不同，拥有菌丝或假菌丝的细胞比酵母细胞更敏感。 这一现象有待进一步研究、证实。 附着面粗糙度 有人发现植入物(钛)上的白念珠菌生物膜对两性霉素B的耐药性与植入物的表面粗糙程度相关。过于粗糙或过于光滑都会降低生物膜的耐药性。 其机理尚不明。 MAP激酶 mkc1p 有丝分裂原激活蛋白(mitogen-activated protein, MAP)激酶 mkc1p活性低的白念珠菌株可以正常产生生物膜，游离细胞对氟康唑的敏感性也不变，但生物膜对氟康唑的敏感性却较之野生株有极大的提高。 即：mkc1仅增加生物膜的耐药性，对游离细胞无影响。 这是目前已知唯一有生物膜特异性的耐药基因。 四. 生物膜抵抗免疫系统的作用 有证据表明，新生隐球菌生物膜可有效抵抗巨噬细胞产生的氧化性抗微生物分子。 另外，体外研究表明，白念珠菌生物膜内存在的人PBMCs(包括单核细胞和巨噬细胞)不仅不吞噬念珠菌细胞，反而对其生物膜的生长有促进作用。 这些现象都提示生物膜对宿主的免疫有抵抗作用，生物膜的形成可能是隐球菌形成长期感染的原因之一。 五. 对抗生物膜形成的可能措施 1 阻止生物膜形成 2 调整用药策略 3 寻找新的靶点 预防生物膜形成 抗荚膜多糖抗体可以抑制生物膜提示体液免疫可能在抑制有荚膜的微生物生物膜形成方面有一定作用；相关疫苗和微生物多糖的抗体可能用于防止起搏器等植入物的生物膜形成。 已有研究证明植入物表面的粗糙程度对真菌生物膜耐药性有影响，对植入物材料的研究和改良也有可能在将来减少真菌生物膜形成。 对已形成的生物膜的用药策略 1. 联合用药 无论是抗真菌药联合使用或是抗真菌药物与抗细菌药物联用均可有效对抗生物膜的耐药性。 我们曾通过对20株新生隐球菌临床分离株进行M27-A药敏检测,证实伊曲康唑与两性霉素B联合用药可明显低真菌MIC值(见表)。且多数受试菌株表现为协同作用或相加作用未观察到拮抗作用。 伊曲康唑及两性霉素B对20株新生隐球菌MIC值平均数 （μg/mL） 单用 联合使用 伊曲康唑 0.2730 0.1195 两性霉素B 0.6830 0.2102 联合抗细菌药大幅提高两性霉素B的抗念珠菌生物膜效力 与对照组相比的生物膜中活细胞比例(%) C.krusei 注：所有菌株均为临床分离株。 2. 新型抗真菌药物的应用 新一代的抗真菌药物如棘白菌素类(卡泊芬净、米卡芬净、安多芬净)以及两性霉素B脂质体均对真