酶联免疫吸附分析实验.pptVIP

酶联免疫吸附试验测定方法enzyme-linked immunosorbent assay , ELISA;主要内容;;一、ELISA的原理;测量时，抗原（抗体）先结合在固相载体上，但仍保留其免疫活性，然后加一种抗体（抗原）与酶结合成的偶联物（标记物），此偶联物仍保留其原免疫活性与酶活性，当偶联物与固相载体上的抗原（抗体）反应结合后，再加上酶的相应底物，即起催化水解或氧化还原反应而呈颜色。其所生成的颜色深浅与欲测的抗原（抗体）含量成正比。 ;酶及其底物;;ELISA的类型和方法;（一）双抗体夹心法（double antibody sandwich method ）;注意事项;（二）ELISA间接法测定抗体;该法的优点是只要变换包被抗原就可以利用同一酶标记抗体。成功的关键在于高纯度的抗原。 在病源抗体的检测中有很好的应用;（三）竞争法;;;（四）双位点一步法;;;（五）捕获法测IgM抗体;;（六）应用亲和素和生物素的ELISA ;ELISA 普遍用作非放射性同位素的成键化验. 在这种方法中, 通常标准配体是固定的, 通过加入溶液相受体或蛋白质来使之成键. 通过加入与受体特异性反应的抗体来定量成键的受体, 而且最初抗体的量以加入第二种能显色的抗体测量. 第二种抗体能识别抗体的末端, 在其末端的碱性磷酸酯或过氧化物酶等与酶发生反应, 从而使溶液显色. ;ELISA应用实例;;;ELISA在饲料安全检测中的应用（盐酸克伦特罗）;;黄曲霉毒素B1(AFB1)酶联免疫定量检测方法;检测实验中酶免疫分析程序;黄曲霉素检验实验样品浓度计算方法：;间接ELISA检测牛白血病抗体(定性);应用夹心ELISA测定粪便标本中的牛病毒性腹泻～粘膜病病毒(BVDV);单稀释ELISA检测鸡传染性喉气管炎抗体：;单克隆抗体ELISA抑制法检测细胞培养物中的猪瘟兔化弱毒;斑点—ELISA(Dot—ELISA)检测狂犬病病毒