基因工程-第二篇章--基因克隆所需的工具酶.pptVIP

苏州科技学院生物系 叶亚新 二、限制酶的使用方法 2、单一限制酶酶切位点的创立 利用甲基化酶的修饰作用改变酶的识别序列，创造新的识别位点 消除反应：某一种限制酶存在两种识别序列，如将其中一个序列中的某个碱基甲基化，使其不能被限制酶识别，从而使另一序列成为单一酶切位点 邻近反应：与限制酶识别序列邻近的碱基有时作为某个甲基化酶的识别序列，而使其不再被限制酶所识别 如BamH 1 ：GGATCC GGATCCGG 三、限制酶的应用 DNA重组 构建质粒 构建DNA的物理图谱 DNA的分子杂交 制备DNA探针 DNA序列分析 构建DNA的物理图谱 DNA物理图谱：标明限制性内切酶在DNA分子上的限制位点数目、限制片段大小及其排列顺序的图谱。又称限制性图谱。 构建物理图谱的常用方法 部分消化法 双酶消化法 构建DNA的物理图谱 构建物理图谱的常用方法 部分消化法 基本原理：首先以某个酶对DNA进行完全消化，再进行部分消化： 部分消化的DNA大片段必定等于完全消化中相应部位的2个以上小片段之和。 根据两类消化中片段大小的关系和交错重叠现象．找出各片段的邻近位置，排出它们的顺序。 某限制酶在一线型DNA分子上有三个切点： 完全消化：A, B, C, D 部分消化：BC, AD, ABC, D, ACD, B, AC