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项目九 高效液相色谱法 一.高效液相色谱法（HPLC）概念？ 指以液体为流动相的色谱技术法 高压泵 化学键合固定相 高灵敏用检测器 二 .高效液相色谱法的特点？ 1、分离效能高 2、选择性高 3 、分析速度快 4、检测灵敏度高 三、HPLC与GC的区别？ 三、HPLC与GC的区别 1．分析对象的不同 2．流动相的区别 3．操作条件的差别 三 分离系统 第三节 高效液相色谱法的分类及分离原理 正相色谱——固定液极性 流动相极性 极性小的组分先出柱，极性大的组分后出峰; 适于分离极性组分 反相色谱——固定液极性 流动相极性 极性大的组分先出柱，极性小的组分后出峰; 适于分离非极性组分 稠环芳烃的分析 应用举例 固定相 极性固定相：硅胶、氧化镁、氧化铝等 非极性固定相：活性炭、聚合物小球等 较常使用的是5～10μm的硅胶吸附剂 流动相 各种不同极性的一元或多元溶剂, 常用的有甲醇、乙醚、苯、乙腈、乙酸乙酯、吡啶等 出柱顺序 强极性组分后出柱，弱极性组分先出柱 应用 中等分子量的油溶性样品如油品、脂肪、芳烃等 不同极性取代基的化合物 结构异构体和几何异构体混合物的分离 应用 主要用于高分子化合物的分子量及分子量分布测定和高分子杂质测定 2005-10版药典大量收载该法 1.聚乙二醇40000 2.聚乙二醇10000 3.聚乙二醇3000 4.聚乙二醇1000 5.聚乙二醇 四、 离子交换色谱(IEC) 离子交换色谱法 油田水质中的阴离子分析 固定相：薄壳型阴离子交换树脂 (3×250mm) 流动相：0.003mol·L-1 NaHCO3 / 0.0024 mol·L-1?Na2CO3 第四节 高效液相色谱 法的应用(P244) 第五节 高效液相色谱分离方法的选择 一、选择合适的液相色谱分离类型 了解分析对象 要分析的组分的大致浓度 干扰物质 试样的性质 结构 分子量 酸碱性 溶解性 二、选择合适的分析条件 色谱柱 流动相 检测器的种类及条件（波长等） 样品的预处理方法 第六节 定性和定量分析 一、定性分析——根据保留时间进行真伪鉴别 《中国药典》（2005版）二部用本法鉴别的品种有484种，一部有8种 二、定量分析 归一法 内标法加校正因子 外标法 《中国药典》（2005版）二部在含量测定和限量检查中有489种用外标法，87个品种用内标法，12种用归一化法 化学键合固定相特点 不易流失 热稳定性好 化学性能好 载样量大 适于梯度洗脱 应用 适用于极性较小的样品分离。可以分离同系物、复杂稠环芳烃以及药物、激素、天然产物、农药残留量的测定 在高效液相色谱法作为分离方法中，有80%的物质的分离依靠反相色谱来完成。在反相色谱中， C18是常用的填充载体，水是常用的流动相弱组分，重要的是选择流动相的强组分，常用的强组分有甲醇、乙腈与四氢呋喃 稠环芳烃多为致癌物质 固定相：十八烷基硅烷化键合相 流动相：20%甲醇-水 ～100%甲醇 线性梯度淋洗，2%/min 流 速：1mL/min 柱 温：50 oC 柱 压：70 ?104 Pa 检测器：紫外检测器 二 液固吸附色谱 分离原理 以固体吸附剂为固定相的液相色谱法。利用各组分在固定相上吸附能力的不同将它们分离 吸附 脱附 再吸附 再脱附 … 分离过程是一个吸附 －脱附的平衡过程 液固吸附色谱法分离机理 环境中有机氯农药残留量分析 固定相：薄壳型硅胶(37 ～50?m) 流动相：正己烷 流 速：1.5 mL/min 色谱柱：50cm?2.5mm(内径) 检测器：差示折光检测器 可对水果、蔬菜中的农药残留量进行分析 三 凝胶色谱（尺寸排阻色谱） 固定相：凝胶(具有一定大小孔隙分布) 分离原理：按分子尺寸大小差异进行分离 当被测组分随流动相通过凝胶色谱柱时: ①?尺寸大于孔径的组分分子不能渗入凝胶孔隙而被全部排斥，最先流出色谱柱 ② 尺寸小于孔径的分子则全部渗入凝胶孔隙，最后流出 ③尺寸中等分子部分渗入较大孔隙，而排斥较小孔隙。因此介于中间流出 分离原理示意图 排阻色谱分离示意图 相对分子质量差别 大于10％