王镜岩-生物化学I-第7篇章 蛋白质的分离纯化和表征—第8篇章 酶通论.ppt

Protein; 蛋白质含有酸/碱AA残基具有两性 碱/酸越大——pI 越大; 蛋白质的分子量 一般在一万至一百万道尔顿之间 1道尔顿＝1×C12绝对质量/12 ≈1.66×10-27千克 ;（一）根据化学组成测定最小分子量;（二）SDS－PAGE测定相对分子质量;;（三）凝胶过滤法测定相对分子质量;;三、蛋白质的胶体性质与蛋白质的沉淀;蛋白质胶体溶液的稳定因素： 1.同种蛋白带同种电荷，相互排斥 2.水膜弹性 蛋白质溶液具有丁达尔效应、布朗运动以及不能通过半透膜等性质;（二）蛋白质的沉淀 Pr从胶体溶液中析出 Ⅰ可逆沉淀： 温和条件，改变溶液pH或Pr所带电荷 Pr结构和性质没有变化 适当条件下可重新溶解 ——非变性沉淀 pI沉淀法、盐析法和有机溶剂沉淀法等 ; 不可逆沉淀 强烈沉淀条件 破坏Pr胶体溶液稳定性 也破坏Pr结构和性质 沉淀不能再重新溶解 ——变性沉淀 如加热沉淀、强酸/碱沉淀、重金属盐 和生物碱沉淀等;1.盐析法 加入中性盐脱去蛋白质的水化层，盐析一般不引起变性;等电点沉淀的蛋白质溶液中加入NaCl后沉淀溶解—盐溶 原因？;盐析;2.有机溶剂沉淀 脱去水化层以及降低介电常数而增加带电质点间的相互作用 3.等电点沉淀;4.重金属盐沉淀 与带负电荷蛋白质结成不溶性盐 5.生物碱试剂和某些酸类沉淀 与带正电荷蛋白质生成不溶性盐 6.加热变性沉淀 天然结构解体，疏水基外露， 破坏水化层及带电状态;四、蛋白质分离纯化的一般原则;五、蛋白质的分离纯化方法;;2、密度梯度（区带）离心;3、凝胶过滤;（二）利用溶解度差别的纯化方法;（三)根据电荷不同的分离方法—电泳;等电聚焦电泳;双向电泳;离子交换层析;（四）利用蛋白质选择性吸附的性质;（五）利用对配体的特异生物学 亲和力的纯化方法;六、蛋白质含量测定和纯度鉴定（略）;第8章 酶通论;酶的发现及研究历史;酵素的发现 ;;enzyme (in yeast);什么是酶？;一、酶催化作用的特点;; 活化能(activation energy) 指在一定温度下，1mol底物全部进入活化态所需要的自由能 单位：KJ/mol ;1. 易失活（温和性）;2. 高效性; 酶的催化;3.专一性; （1）酶浓度的可调性 （2）通过激素调节酶活性 （3）反馈抑制调节酶活性 （4）抑制剂和激活剂 （5）别构调控、共价修饰、同工酶等 ;二、酶的化学本质及分类;; 单纯酶 ：只有蛋白质 结合酶（缀合酶）：脱辅酶 + 辅助因子 ;羧肽酶;;结合酶中： 单独酶蛋白或辅助因子没有催化活性 一种酶蛋白一般只与一种辅助因子结合 同种辅助因子可与不同的酶蛋白结合 ;;monomeric enzyme：一般由一条肽链组成 oligomeric enzyme：为寡聚蛋白，≥2个亚基 multienzyme complex：几种酶靠非共价键 彼此嵌合而成。 由数个独立的酶组合起来形成络合体，催化一系列反应。（如糖代谢、脂代谢）;三、酶的命名和分类;优点 　命名简单 　　　　　　应用历史较长，使用方便 缺点　　　一名数酶、一酶数名 为了适应酶学发展的新情况，国际酶学会议于1961年提出一个新的系统命名法及分类原则，已被国际生化协会采用。;（二）国际系统命名法：; 底物1 ：底物2 + 反应性质+酶 ; 系统名：包括所有底物的名称和反应类型。;（三）国际系统分类编号;;氧化-还原酶催化氧化-还原反应，催化氢的转移或电子传递。 主要包括脱氢酶(dehydrogenase)和氧化酶(Oxidase)。 如，乳酸(Lactate)脱氢酶催化乳酸的脱氢反应。;（1）脱氢酶类：催化直接从底物上脱氢的反应;（4）加氧酶（双加氧酶和单加氧酶）;转移酶催化基团转移反应，即将一个底物分子的基团或原子转移到另一个底物的分子上。 根据X分类：转移碳基、酮基或醛基、酰基、糖基、烃基、含氮基、含磷基和含硫基的酶。 例如， 谷丙转氨酶催化的氨基转移反应。;水解酶催化底物的加水分解反应。 主要包括淀粉酶、蛋白酶、核酸酶及脂酶等。 例如，脂肪酶(Lipase)催化的脂的水解反应：;裂合酶催化从底物分子中移去一个基团或原子形成双键的反应及其逆反应。 主要包括醛缩酶、水化酶及脱氨酶等。 例如， 延胡索酸水合酶催化的反应。 ;异构酶催化各种同分异构体的相互转化，即底物分子内基团或原子的重排过程。 例如，6-磷酸葡萄糖异构酶催化的反应;合成