生物：专题5.3《血红蛋白的提取和分离》教学讲稿(新人教选修1)08.pptVIP

透析过程动画演示 利用透析袋透析 3.纯化 实现途径： 4.纯度鉴定 (1)方法： （2）原理： 凝胶色谱法 电泳（常用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳） 通过电泳区带位置的比对，确定蛋白质的纯度或相对分子质量。即选用一组已知浓度的标准蛋白（或相对分子质量）的标准蛋白质与需要鉴定的蛋白质同时进行电泳，通过比对二者电泳的区带位置，确定需要的鉴定的蛋白质的纯度（或相对分子质量） 蛋白质的提取和分离 （三）凝胶色谱制作 1.凝胶色谱柱的制作 　　①取长40厘米，内径1.6厘米的玻璃管，两端需用砂纸磨平。 ②底塞的制作： 　　打孔→挖出凹穴→安装移液管头部→覆盖尼龙网，再用100目尼龙纱包好。 　　 ③顶塞的制作： ④组装： ⑤安装其他附属结构。 打孔→安装玻璃管 　　底塞中插入的玻璃管的上部不得超出橡皮塞的凹穴底面，否则难以铺实尼龙网，还会导致液体残留，蛋白质分离不彻底。 注 意 2.凝胶色谱柱填料的处理 计算凝胶量 配置凝胶悬浮液 装填 洗涤平衡 　　凝胶装填时尽量紧密，以降低凝胶颗粒之间的空隙。装填凝胶柱时不能有气泡存在：因为气泡会搅乱洗脱液中蛋白质的洗脱次序，降低分离效果。 注 意 　　缓冲液液面不要低于凝胶表面，否则可能有气泡混入，影响液体在柱内的流动与最终生物大分子物质的分离效果。不能发生洗脱液流干，露出凝胶颗粒的现象，否则重新填装。 注 意 本课题学习目标 体验从复杂体系中提取生物大分子的基本过程和方法，并了解色谱法、电泳法等分离生物大分子的基本原理。 1、主要概念：①凝胶色谱法 ②电泳法 ③缓冲溶液 它们在血红蛋白的提取中分别起到什么作用。 主要原理： ①凝胶色谱法分离蛋白质的原理 ②电泳法分离样品的原理 ③缓冲溶液的组成和作用机理 3、课题重点：凝胶色谱法的原理和方法 4、课题难点：①样品的处理 ②色谱柱填料的处理和色谱柱的装填。 血液 血浆 水 分 固体物质： 血浆蛋白、无机盐、磷脂、葡萄糖等 血细 胞 白细胞 血小板 红细胞 （最多） 血红蛋白 （90％） 两个α－肽链 两个β一肽链 四个亚铁血红素基团 2.提问：血液有哪些成分？ 1.提问：用鸡的红细胞提取DNA，用猪、牛、羊的红细胞提取血红蛋白的原因是什么？ 鸡的红细胞具有细胞核，含有DNA，便于进行DNA的提取；人的红细胞无细胞核，结构简单，血红蛋白含量丰富，便于提取血红蛋白。 血红蛋白 血红蛋白 两个α－肽链 两个β一肽链 四个亚铁血红素基团 每个肽链环绕一个亚铁血红素基团， 此基团可携带一分子氧或一分子二 氧化碳，血红蛋白因含有血红素而 呈红色。 血红蛋白的特点： 1.分离生物大分子的基本思路： 选用一定的物理或化学的方法分离具有不同物理或化学性质的生物大分子。 2.蛋白质分离和提取的原理： 根据蛋白质各种特性的差异，如分子的形状和大小、所带电荷的性质和多少、溶解度、吸附性质和对其他分子的亲和力等等，可以用来分离不同种类的蛋白质。 一、血红蛋白的提取和分离 （一） 凝胶色谱法（分配色谱法） 2.凝胶： 大多数凝胶是由多糖类化合物（如葡聚糖或 琼脂糖）构成的多孔小球体，内部有许多贯穿的通道。 根据被分离物质的蛋白质相对分子质量的大 小，利用具有网状结构的凝胶，来进行分离。 1.概念： 3.凝胶色谱法的原理 ①当相对分子量不同的蛋白质通过凝胶时，相对分子量较小的蛋白质容易进入凝胶内部的通道，路程较长，移动速度较慢;②而相对分子量较大的蛋白质无法进入凝胶内部的通道，只能在凝胶外部移动，路程较短，移动速度较快。相对分子质量不同的蛋白质分子因此得以分离。③依据的特性是：蛋白质分子量的大小。 4.凝胶色谱法分离蛋白质的原理和具体过程 凝胶色谱法分离蛋白质过程的动画演示 （二）缓冲溶液 1.概念: 在一定的范围内，凡是能够抵制外加少量强 酸或强碱的影响使原来溶液PH值基本保持不变的混 合溶液。 能够抵制外界的酸和碱对溶液PH值的影响， 维持PH基本不变。 2.作用: 由足够浓度的缓冲对组成。常见缓冲对有三类，即①由弱酸及其所对应的盐，②多元弱酸的酸式盐及其对应的次级盐，③弱碱及其所对应的盐组成。如H2CO3/NaHCO3，醋酸/醋酸钠，NaH2PO4/Na2HPO4，NH4H2O/NH4CL等 3.组成： 利用缓冲液模拟细胞内的PH环境，保证 血红蛋白的正常结构和功能，便于观察(红色)和科 学研究(活性) 4.提问：在本课题中使用的缓冲液是:__________ , 其目的是: 磷酸缓冲液