第1.2节：基因工程的最基本操作程序.pptVIP

(三)将目的基因导入受体细胞 将目的基因导入植物细胞 （2）基因枪法 基因枪法又称微弹轰击法，是利用压缩气体产生的动力，将包裹在金属颗粒表面的表达载体DNA打入受体细胞中，使目的基因与其整合并表达的方法。 适用于单子叶植物 (三)将目的基因导入受体细胞 将目的基因导入植物细胞 （3）花粉管通道法 适用于被子植物 植物花粉在柱头上萌发后，花粉管要穿过花柱直通胚囊。花粉管通道法就是在植物受粉后，花粉形成的花粉管还未愈合前，剪去柱头，然后，滴加DNA（含目的基因），使目的基因借助花粉管通道进入受体细胞。 (三)将目的基因导入受体细胞 将目的基因导入植物细胞 雄蕊 雌蕊 极核（2个） 卵细胞（1个） 胚 珠 子房 子房壁 胚 囊 珠被 +精子 +精子 受精卵 受精极核 发育 胚 发育 胚乳 果皮 种皮 种子 果实 2N 2N 2N 2N N + N 2N 2N N +N + N 3N 3N 补充：被子植物的双受精作用 (三)将目的基因导入受体细胞 将目的基因导入动物细胞 （1）方法：显微注射法（将基因表达载体提纯，用显微仪注射到受精卵中） （2）受体细胞： ——受精卵 (三)将目的基因导入受体细胞 将目的基因导入动物细胞 （3）操作过程： 提纯含目的基因表达载体 显微注射 受精卵 移植到子宫 受精卵发育 新性状动物 (三)将目的基因导入受体细胞 将目的基因导入微生物细胞 常用法：Ca2+处理法 常用菌：大肠杆菌 微生物作受体细胞原因： 繁殖快、多为单细胞、遗传物质相对少 （感受态细胞法） 受体细胞：原核细胞 (三)将目的基因导入受体细胞 将目的基因导入微生物细胞 思考：为什么要用Ca2+处理受体细胞？ 用Ca2＋处理，增加细菌细胞壁的通透性。 过程： Ca2+处理大肠杆菌 感受态细胞 表达载体与感受态细胞混合 感受态细胞吸收DNA (三)将目的基因导入受体细胞 小结 基因工程的基本操作程序 (四)目的基因的检测与鉴定 检测 ①导入检测：目的基因是否导入受体细胞 方法—— DNA分子杂交 ②表达检测 转录检测—— 翻译检测—— 分子检测法 鉴定 抗虫鉴定 抗病鉴定 活性鉴定等 个体水平的鉴定 分子杂交 抗原抗体杂交 基因工程的基本操作程序 (四)目的基因的检测与鉴定 1、检测目的基因是否导入受体细胞 ① 首先取出转基因生物的基因组DNA； （1）方法: DNA分子杂交 （2）过程: ② 将含目的基因的DNA片段用放射性同位素等作标记,以此做探针； ③ 使探针和转基因生物的基因组杂交,若显示出杂交带,表 明染色体已插入染色体DNA中。 第1.2节 基因工程的基本操作程序 回顾：培育抗虫棉的简要过程 提取 棉花细胞(含抗虫基因) 苏云金芽孢杆菌 抗虫基因 与运载体DNA 拼接导入 普通棉花(无抗虫特性) 棉花植株(有抗虫特性) 苏云金芽孢杆菌 棉花细胞 第1步 第2步 第3步 第4步 目的基因 载体 导入 表达 基因工程的基本操作程序 （一）目的基因的获取 （二）基因表达载体的构建 （三）将目的基因导入受体细胞 （四）目的基因的检测与鉴定 基因工程的基本操作程序 (一)目的基因的获取 目的基因： 主要指的是编码蛋白质的基因，也可以是一些具有调控作用的因子。 基因: ——具有遗传效应的DNA片段。 原核细胞基因与真核细胞基因结构是一样的吗？ 基因工程的基本操作程序 (一)目的基因的获取 原核细胞的基因结构(补充内容） 非编码区 非编码区 编码区 编码区上游 编码区下游 与RNA聚合酶结合位点 启动子 终止子 原核细胞基因 编码区（编码序列）：能指导有关蛋白质的合成，即能够编码蛋白质 非编码区（调控序列）：不能指导有关蛋白质的合成，但有调控遗传信息表达的核苷酸序列，如含有RNA聚合酶结合位点、启动子、终止子等 基因工程的基本操作程序 (一)目的基因的获取 真核细胞的基因结构(补充内容） 编码区 非编码区 非编码区 与RNA聚合酶 结合位点 内含子 外显子 启动子 终止子 编码区上游 编码区下游 真核细胞基因 编码区： （间隔、不连续） 外显子：能编码蛋白质的DNA序列 内含子：不能编码蛋白质的DNA序列 非编码区： 与原核生物具有相似功能的RNA聚合酶结合位点、启动子、终止子 基因工程的基本操作程序 (一)目的基因的获取 原核细胞与真核细胞的基因结构比较(补充内容） 连续 不连续 编码区 非编码 思考 编码相同数目氨基酸的蛋白质，原核细胞与真核细胞基因结构一样长吗？ 基因工程的基本操作程序 (一)目的基因的获取 获取目的基因的方法： 1）从基因文库中获取目的基因； 2）利用PCR技术扩增目的基因； 3）利用化学方法人