白木香基因组DNA的提取及AFLP银染体系的建立.pdfVIP

药 　物 　生 　物 　技 　术 14 Phar maceutical Biot echnolo gy 　2007 ,14 ( 1) :14～17 白木香基因组 D NA 的提取及 AFL P 银染体系的建立 赵 　翾 ,赵树进 (广州军区 广州总医院药学部 , 广东 广州 5 100 10) 摘 　要 　用改良的 C TAB 法提取不同居群的白木香基因组 DN A ,通过优化 A FL P 技术中关键步骤的参数 , 建立适合白木香的 A FL P 银染反应体系 。结果表明 ,改良的 C TAB 法提取的白木香基因组 DNA 纯度高 ,完整 性好 ,满足 A FL P 分析的要求 ;250 ng 的基因组 DN A 用 Eco R I 和 M se I 37 ℃消化 3 h 后可以被完全酶切 ,酶切 产物和接头经 16 ℃连接过夜后 ,用带有一个选择性碱基的引物和带有 3 个选择性碱基的引物分别进行预扩增和 选择性扩增 ,扩增产物经变性聚丙烯酰胺凝胶电泳分离 ,用 A gN O3 染色得到了清晰的指纹式样 ,为下一步的遗 传分析奠定了基础 。 关键词 　白木香 ;DN A 提取 ;扩增片段长度多态性 ;银染 ;建立 中图分类号 :Q781 　文献标识码 :A 　文章编号 : 100589 15 (2007) 0 100 1404 ( ( ) ) 　　白木香 A qui l a ri a s i nens is Lo ur . Sp reng 种鉴定 、濒危资源的保护和中药沉香的合理利用奠 ( 是我 国名贵药材 国产沉香 L i g n um A qui l a ri ae 定了研究基础 。 R es i nat um ) 的药源植物 , 它 以含有树脂的木材入 1 　材料与方法 药 。国产沉香在中医上有行气止痛 、温中止呕、纳 气平喘的功效 ,临床上用于治疗胸腹胀闷疼痛 、胃 1 1 　材料 寒呕吐呃逆 、肾虚气逆喘急等病症[ 1] ,有很高的药 1 1 1 　试验材料 　2005 年 9 月到 12 月采集广东 ( ) ( ) 用价值 。1999 年 白木香被列入 《中国植物红皮 华南植物园 H Y 、广东东莞 D G 、深圳仙湖植物 [2 ] ( ) ( ) ( ) 书》,定为国家二级重点野生保护植物 。 园 H G 、广东茂名 MM 、广东遂溪 SX 、广西药 ( ) ( ) ( ) 药材的准确鉴定是保证临床用药安全性和有 用植物园 X Y 、广西陆川 L C 、海南屯昌 TC 、 ( ) 效性的首要条件 。基于 DN A 多态性的分子标记 云南西双版纳热带植物园 XR 9 个白木香居群和