凝胶过滤层析法.pptVIP

凝胶过滤层析法;一、凝胶过滤介质;凝胶过滤介质应具备的条件;常见的凝胶种类;凝胶过滤介质的种类;主要凝胶过滤介质的牌号及骨架结构;主要的凝胶过滤 介质;Date;2、性能：;(3)物理稳定性 pH中性湿态珠体可经受120℃、30min高压灭菌而不影响色谱性能;葡聚糖凝胶(G);Sephadex的型号及性能;3、主要用途：孔径较小的凝胶主要用于脱盐、肽与其他小分子的分离；孔径较大的凝胶用于蛋白质与其他大分子的分离。DNA级的Sephadex适用于DNA或低聚核苷酸的分离。;Sephadex经改性后比其母体具有更广泛的用途，适用于脂类、甾类、脂肪酸、激素、维生素及其他小分子的分级分离。;(二)、琼脂糖系 由经过纯化的琼脂糖制备，其中含有极小的带电基团。利用琼脂糖热溶液冷却时可凝胶化的特点，能方便地制成珠状物。在凝胶过程中由单独的多糖链先形成双螺旋，然后聚集成胶束。胶束之间有孔，孔的大小取决于胶束的??少即琼脂糖的浓度。传统的琼脂糖凝胶非特异性吸附极低，分离范围很广，分离范围从10000所以适用于分子量差距较大的分子间分离，分辨率不很高。琼脂糖凝胶有两种牌号Bio－Gel A系和Sepharose;Date;Bio－Gel A系型号及性能;Sepharose系型号能性能;Sepharose是该系中最早的产品，为非交联结构，因此不能进行高压灭菌，仅能在2～40℃范围内使用。根据琼脂糖含量的不同，对含量为2％、4％及6％的产品分别命名为2B、4B和6B。由于新型凝胶的不断出现，此型凝胶有逐渐被淘汰的趋势。;Sepharose CL是琼脂糖珠体与2，3－二溴丙醇反应后具有共价交联键的产物。交联结构大大提高了珠体的热稳定性及 物理化学稳定性，但对孔结构无明显影响。交联后凝胶在还原条件下经碱水解去除了硫酸根，减少了带电基团，使非特异吸附比其母体小。凝胶在中性条件下可经受120 ℃消毒，处理后其色谱性能不变。特别适用于含有机溶剂的分离，流速比传统的Sepharose有明显提高并可广泛用于离子交换剂及亲和吸附剂的母体。;Superose由珠状琼脂糖经过两次交联而制备的新型凝胶。用含双环氧基及多环氧基的混合长交联剂对琼脂糖珠体进行第一阶段交联，然后再与含双环氧基的短链交联剂进行第二次交联。经两次交联反???后的珠体大大提高了介质的刚性和增强了物理化学稳定性。用0.1mol/L的HCl溶液及0.1mol/L的 NaOH在40℃处理两周，色谱性能无明显变化，还可经受70％甲酸及30％乙腈处理。;Superose为刚性－半刚性珠体，在高黏性液体如8mol/L尿素下也能保持适当流速将广泛的分离范围及高分辨率集于一身，适用于糖类、核酸、病毒等的分离，特别是包含体蛋白在促溶剂中的纯化。能一次性分离生物分子大小差异较大按的混合物。由于颗粒细小，粒度分布均匀，柱效高，可允许高流速，适用于中、高压层析系统分离。;Sepharose Fast Flow 是新型的BioProcess凝胶介质，经过高度交联的琼脂糖珠体。具有机械强度高、流速快、极高的物理化学稳定性及非特异性吸附极低等特点，而适合工业规模生产使用。对蛋白质的回收率很高，并可用多种促溶剂及有机溶剂或1～2mol/L的NaOH进行清洗。;(三)、聚丙烯酰胺系;Date;Bio－Gel P类凝胶;(四)、Sephacryl系列;Date;Sephacryl系列产品性能;(五)、Superdex系列产品 是最新的凝胶过滤介质，属BioProcess介质中的一种。是将葡聚糖以共价键方式结合到高交联的多孔琼脂糖珠体上形成的复合凝胶。是将交联葡聚糖优良的过滤选择性及高交联的琼脂糖的物理化学稳定性集于一身的具有优良选择性和高分辨率的产品。可在0.1mol/LHCl或1mol/LNaOH溶液中40℃处理400小时而分辨率保持不变。;Superdex结构;Superdex(BioPrecess介质)素列产品性能;(六)、聚乙烯醇系(Toyopearl)：以交联聚乙烯醇为骨架的凝胶过滤介质，20世纪80年代初部世，由美国RH公司与日本曹达公司联合开发。是多孔的三维网状结构，大分子链上含有丰富的羟基，使其具有高度亲水性，进行化学改性后可转变为含有多种功能基的离子交换剂及亲和吸附剂。Fractogel TSK是该系列的类似产品，适用于HPLC(高效液相层析)。;Toyopearl系型号及性能;二、分子筛原理;Date;Date;凝胶层析中常用的术语和参数;床体积：膨胀后的基质在层析柱中所占有的体积（Vt）表示。;膨胀度：在一定溶液中，单位重量的基质充分溶胀后所占有的体积，用Vg表示。即每克溶胀所具有的床体积。;凝胶过滤的分配常数;从上式可以看出，Ve