药物分析第三章精品.pptVIP

* 卤素原子与碳原子直接相连 * 本法适用于含卤素有机药物结构中卤素原子结合不牢固的药物。 * * 本法特点是简便、快速、破坏完全，尤其适用于微量样品的分析。 * 生物样品的介质组成比较复杂，包括有高分子蛋白质和低分子糖、脂肪、尿素等有机物，Na+、K+、X-等无机物等。体内药物存在形式：游离型（原型药物、代谢物）;药物与蛋白质的结合物；缀合物（药物经代谢后，极性增强，与内源性物质结合生成缀合物）。 * 抗凝剂：最常用肝素 血清一般占全血量的40%左右。 血浆一般占全血量的50%左右。 * 氯噻酮与红细胞结合，动力学行为与在血浆中不同，需测全血 一般用于临床动物试验或药物中毒的尸检 * 取样方便无害，一般用于体内微量元素的测定，毒性药物监测等 * 离心 全血 离心 上层：血清 下层：血细胞（凝块） 上层：血浆 下层：血细胞 血液 自然凝结 加抗凝剂 2. 血样的制备 3. 血样的主要成分区别 成分 血 浆 血 清 全 血 纤维 蛋白原 有 无 有 血细胞 无 无 有 血浆比血清分离快，制取的量多， 样品纯化较容易；而且大多数药物在体 内达到稳定状态时，其在血浆中的浓度 与作用点的浓度密切相关，可以作为在 作用部位药物浓度的可靠指标。为最常 用的血样。 血清成分最接近组织液化学成分， 最能反应机体的具体情况；但获取量小。 全血的净化较麻烦，尤其是溶血 后，血色素会给测定带来干扰，只在个 别情况使用。 4. 血样的保存 血样采集后应及时分离血浆或血清， 最好马上分析； 短期保存时应置于冰箱冷藏室（4℃）中; 长期保存时应置于冰箱冷冻室 （-20℃）中。 （二）尿液 测定尿中药物浓度时应采用时间 尿，即将一定时间内（如8h 、12h或 24h等）排泄的尿液全部储存起来， 并记录其体积，取一部分测定药物浓 度，然后乘以尿量求得排泄总量。 1. 采集 2. 保存 采集后应立即测定 不能立即测定时，加入防腐剂（如甲苯、氯仿、浓盐酸等）置冰箱中保存 保存时间为24~36h，可置冰箱冷藏室（4℃）中，长时间保存时，应冷冻 （-20℃） 3. 特点 体内药物的清除主要是通过尿液 排出，药物可以原型（母体药物）或 代谢物及其缀合物等形式排出。 尿药测定主要用于药物剂量回收 研究，尿清除率、生物利用度的研究， 或药物代谢类型的确定。 优：药物浓度高，收集方便 缺：浓度随时间变化大；与血药浓度 相关性差；受患者肾功能影响大； 尿液不易采集完全且不易保存 （三）组织样品 测定之前首先进行匀浆化，取采集的组织样品，加入一定量的水或缓冲液，于匀浆机中匀浆化处理，制成一定浓度的水基质匀浆液，制备或低温贮藏。 1. 采集 2. 制备 （四）毛发样品 取枕后部，采集距头皮1cm以上 的头发约0.5~1g。 1. 采集 充分洗净后，有机破坏。 2. 制备 二 、生物样品分析前处理技术 应根据生物样品的种类、被测药物 理化性质、浓度范围、存在形式、测定 方法采取相应的分析方法，从而确定合 适的前处理方法。 （一）蛋白质去除 1. 目的 使结合型药物释放出来 预防提取过程中蛋白质的干扰 保护仪器性能，延长使用期限 2. 方法 （1）加入与水相混溶的有机溶剂 水溶性的有机溶剂可使蛋白质的分子内及分子间的氢键发生变化而使蛋白质凝聚，释放出与蛋白结合的药物。 常用有机溶剂：乙腈、甲醇、乙醇、丙 酮、丙醇、四氢呋喃。 （2）加入中性盐 中性盐的加入将与蛋白质水合的 水置换出来，使蛋白质脱水而沉淀。 常用中性盐： 饱和硫酸铵、硫酸钠、镁盐、磷 酸盐及枸橼酸盐。 （3）加入强酸 当pH低于蛋白质的等当点时，蛋 白质以阳离子形式存在，加入强酸后， 可与蛋白质阳离子形成不溶性盐而沉 淀。 常用强酸： 10%三氯醋酸、6%高氯酸、硫酸- 钨酸混合液及5%偏磷酸。 注意： 1. 经过强酸处理后上清液pH为0~4， 不适于在酸性条件下分解的药物。 2. 为避免对下一步测定的干扰，过量 的强酸要除去。 （4）加入含锌盐及铜盐的沉淀剂 当pH高于蛋白质的等当点时， 金属阳离子与蛋白质分子中带阴电荷 的羧基形成不溶性盐而沉淀。 常用的沉淀剂： CuSO4-NaWO4 、 ZnSO4-NaOH