生物化学-酶讲义.ppt

第二章 酶;本章内容 第一节 概述 第二节 酶催化反应的机制 第三节 酶促反应动力学 第四节 酶的活性调节 ;第一节 概述 ;1913 Michaelis和Menten提出米氏学说—酶促动力学原理。 ;1926 Sumner首次从刀豆中提出脲酶结晶，并证明具有蛋白质性质。 1930 年Northrop等得到了胃蛋白酶、胰蛋白酶和胰凝乳蛋白酶的结晶，并进一步证明了酶是蛋白质。 ; 1969 化学合成核糖核酸酶。 1967-1970 从E.coli 中发现第I、第II类限制性 核酸内切酶。 ; 20世纪80年代发现某些RNA有催化活性，还有一些抗体也有催化活性，甚至有些DNA也有催化活性，使酶是蛋白质的传统概念受到很大冲击。 ;二、酶的概念;三、酶作为生物催化剂的特点;酶的催化效率比化学催化剂高107-1013 倍，比非催化反应高108 -1020 倍。 例如：过氧化氢分解 2H2O2 2H2O + O2 用Fe+ 催化，效率为6×10-4 mol/mol·S，而用过氧化 氢酶催化，效率为6 ×106 mol/mol·S。 用?-淀粉酶催化淀粉水解，1克结晶酶在65?C条件下可催化2吨淀粉水解。 ; 即酶只能对特定的一种或一类底物起作用，这种 专一性是由酶蛋白的立体结构所决定的。可分为： 绝对专一性：有些酶只作用于一种底物，催化一个 反应，而不作用于任何其它物质。 相对专一性：这类酶对结构相近的一类底物都有作 用。 立体异构专一性：这类酶还能辨别底物不同的立体异构 体，只对其中的某一种构型起作用，而 不催化其他异构体。;酶促反应一般在常温、常压、中性pH 条件下进行。 高温或其它苛刻的物理或化学条件，将引起酶的失活。 ;4.酶的催化活性可调节控制;（一）根据酶的化学组成分类： 1 单纯酶：只含有蛋白质成分，如：脲酶、溶菌酶、淀粉 酶、脂肪酶、核糖核酸酶等。 2 结合酶：含有蛋白成分（酶蛋白）和非蛋白成分（辅助因 子）。 ;蛋白质部分：酶蛋白; 辅酶:与酶蛋白结合疏松，可用 透析或超滤的方法除去。 ;（二）根据酶蛋白结构特点分类;由几种不同功能的酶彼此聚合形成的多酶复合物。 ;一些多酶体系在进化过程中由于基因的融合，多种不同催化功能存在于一条多肽链中，这类酶称为多功能酶。 由单肽链构成的，含有若干个酶活性的结构域。;五、酶的命名;(2)国际系统命名法 系统名称包括底物名称、构型、反应性质。 例如： 酶催化的反应: 谷氨酸 + 丙酮酸 ?-酮戊二酸 + 丙氨酸 习惯名称:谷丙转氨酶 系统名称:丙氨酸：?-酮戊二酸氨基转移酶 ; (3)酶的国际分类法及编号 国际酶学委员会根据酶催化的反应类型，将酶分为六大类，分别用1、2、3、4、5、6的编号来表示。;乳酸脱氢酶 EC 1. 1. 1. 27;六、酶的活力测定;? 研究酶促反应速度，以酶促反应的初速度为准（底物消耗低于5%）。 ;2.酶活力测定的基本原理;3.酶活力测定的方法;4.酶活力的表示方法;③习惯单位: 在实际使用中,不同酶有各自的规定,如: 糖化酶活力单位:在规定条件下,每小时转化可溶性淀粉 产生1mg还原糖(以葡萄糖计)所需的酶量 为1个酶单位。 蛋白酶活力单位：规定条件下，每分钟分解底物酪蛋白 产生1μg酪氨酸所需的酶量。 ;(2)比活力（specific activity） 酶的比活力（比活性）：每单位（一般是mg）蛋白质中 的酶活力单位数（酶单位/mg蛋白）。 实际应用中也用每单位制剂中含有的酶活力数表示（如：酶 单位/mL（液体制剂），酶单位/g（固体制剂））， 对同一种酶来讲，比活力愈高则表示酶的纯度越高（含杂质 越少），所以比活力是评价酶纯度高低的一个指标。 ;在评价纯化酶的操作方法是否优劣时，要同时考虑两个概念： 纯化倍数与回收率 纯化倍数=某纯化操作后的比活力/粗提液的比活力 回收率=某纯化操作后的总活力/粗提液的总活力  ;(3)转换数（ TN or Kcat