第2章微生物发酵制药工程-2.pptVIP

生物制药工程;1.1 概述 1.2 制药微生物生长与生产的关系 1.3 制药微生物菌种的建立 1.4 制药微生物培养基制备 1.5 灭菌工艺 1.6 制药微生物发酵培养技术 1.7 发酵工艺过程的检测与控制;1.3 制药微生物菌种的建立;1.3.1 新药生产菌的选育;1.3.1.1 自然分离;药物的筛选;高通量筛选：以分子水平和细胞水平的实验方法为基础，以微板形式作为实验工具载体，以自动化操作系统执行试验过程，以灵敏快速的检测仪器采集实验结果数据，以计算机分析处理实验数据，在同一时间检测数以千万的样品，并以得到的相应数据库支持运转的技术体系，它具有微量、快速、灵敏和准确等特点。 ;高内涵筛选：在保持细胞结构和功能完整性的前提下，同时检测被筛样品对细胞形态、生长、分化、迁移、凋亡、代谢途径及信号转导各个环节的影响，在单个实验中获取大量与基因、蛋白及其他细胞成分相关的信息，确定其生物活性和潜在毒性的过程。 ;样品采集;1.3.1.2 自然选育;1.3.1.3 诱变育种;诱变方案设计;诱变育种流程;1.3.1.4 原生质体融合育种;1.3.1.5 基因组shuffling;基因组重排的流程 ;基因组重排同经典育种方法比较 ;基因组重排与经典诱变技术在泰乐菌素生产菌株改造上的比较 ;1.3.2 菌种保藏;几种常用保藏方法比较;1.3.3 菌种库建立与质量控制;建库流程;菌种库的质量管理;小结与要求;思考题;1.4 制药微生物培养基制备;培养基定义与组成;1.4.1 碳源;微生物对不同糖的利用效率排序为单糖双糖戊糖多糖。 在基本培养基(minimal medium)中，碳源的可利用性依次按葡萄糖、乳酸盐、苹果酸盐、乙酸盐和二氧化碳顺序递减，其ATP的需求按34.8mmol、73.8mmol、64.4mmol、99.5mmol和153.8mmol增加， 表明碳源分子结构越简单，形成菌丝量过程需要更高的ATP 的供应。;1.4.2 氮源;1.4.2.1 有机氮源;黄豆饼粉(soybean powder) 全脂黄豆饼粉(含油脂18％) 低脂黄豆饼粉(含油脂9％) 脱脂黄豆饼粉(含油脂2％) 棉籽饼粉： 低温提取油脂后加工制备的，Pharmamedia； 高温提取油脂后加工制备的，Proflo ;玉米浆(corn steep liquir, CSL) 丰富氨基酸(丙氨酸、谷氨酸、缬氨酸、苯丙氨酸等)、还原糖、磷、微量元素和生长素， 玉米淀粉生产的副产物，固体物含??在50％左右， 含有很多的有机酸如乳酸 。;蛋白胨：由动物组织和植物经酸或酶水解制备； 酵母粉或酵母浸汁：含有蛋白质、氨基酸、维生素等，主要来自啤酒酵母和面包酵母。 鱼粉：含有60％左右的粗蛋白，12％左右的油脂，4％～5％的氯化钠。 尿素：也是常用的有机氮源， ;1.4.2.2 无机氮源;1.4.3 无机盐及微量元素;磷在菌体生长、繁殖和代谢活动中起着极其重要的作用。一方面磷是构成核酸、磷脂、许多辅酶或辅基(辅酶I、辅酶Ⅱ、辅酶A、NAD、NADP等)以及高能磷酸化合物的重要原料，另一方面磷在代谢调节方面也起着很重要的作用：磷能促进糖代谢的进行，促进微生物的生长；一般都是以K2HP04和KH2P04的形式人为地提供。;磷酸盐的浓度在发酵培养基中是一个限制性成分。高浓度磷酸盐对许多抗生素生物合成有显著的抑制作用。 ;1.4.4 生长因子(growth factor);1.4.5 前体及其他因子的选择 ;1.4.6 培养基的种类与选择;1.4.6.1 固体培养基;生产中常用的孢子培养基有麸皮培养基，大(小)米培养基，由葡萄糖(或淀粉)、无机盐、蛋白胨等配制的琼脂斜面培养基等。 ;1.4.6.2 种子培养基;在培养基中也常用一些豆饼粉之类的氮源，它们除被菌体用于生长以外，在种子培养基中加入这些微小颗粒状物，还有利于孢子发芽后形成的短小菌丝体附着在这些小颗粒上，使菌丝体呈分散状生长，以避免由于孢子量接种较少而使菌丝体结球。 最后一级种子培养基的成分最好能较接近发酵培养基 ;1.4.6.3 发酵培养基;1.4.6.4 补料培养基;1.4.7 影响培养基质量的因素;1.4.7.1 原料质量;1.4.7.2 水质;1.4.7.3 培养基的黏度;1.4.8 发酵培养基的配置原则;1.4.9 培养基的设计基本思路;1.4.10 理论转化率与实际转化率;思考题; Thanks for your attention