飞秒激光在生命科学中的应用介绍.ppt

凋亡小体空间量化模型3D旋转图 植入前胚胎细胞凋亡现象观测 Apoptosis in the mouse preimplantation embryos 凋亡小体在胚胎4个球壳区域的分布比例 凋亡绝大部分分布于胚胎的外围（外面两个球壳），最可能发生于滋养外胚层（近70%），与文献理论预测一致 凋亡小体的壳层分布比例 等厚球壳层 囊胚腔 ICM（内细胞团） TE（滋养外胚层） GFP转染-拟南芥生长过程观测 实验意义 拟南芥：生物学研究的模式生物之一 形体微小，种子0.2-0.3um ，成熟植株高约15cm 生长周期短，仅为6-8周 自花授粉，容易结果 拟南芥花 GFP转染-拟南芥的培养和生长过程观测 转染：产生GFP的基因与植物本身的肌动蛋白基因融合，因此植物细胞骨架中产生GFP。GFP转染的种子 由植物所赠送。 飞秒激光成像技术在生命科学中的应用 马万云 原子分子纳米科学教育部重点实验室 2007 实验室科研探究 ???… 飞秒激光的特点 脉冲很窄：几个飞秒，1fs=10-15s， 1／1000万亿秒，比利用电子学方法所获得的最短脉冲要短几千倍。 瞬时功率很高：1012W。 能聚焦很细：能聚焦几百nm,比头发的直径还要小的空间区域，使电磁场的强度比原子核对其周围电子的作用力还要高数倍。 应用广泛：外科手术、医学成像 、生物活体检测、病变早期诊断…… 重点:飞秒激光双光子成像技术对大、厚、活的生物样品的四维实时观测 科研项目 植入前胚胎发育遗传学诊断的分子雷达-光学相干技术系统的研究－－国家973计划（2002-2007）001CB510307 ， 正在进行。 活细胞中生物大分子相互作用的四维可视化观测--国家自然科学基金项目（2005-2007） 正在进行。 高灵敏实时原位观测方法相关物理、化学基础问题及其在生命科学中的应用--教育部科学研究重大项目 (2006-2008) 306020，正在进行。 立项背景 要深入地了解复杂的生物系统需要更量化的生物学 “Bio-X” 当生物学日益需要更丰富的数据时，它就愈加要求具有物理科学特点的分析方法和计算方法。 由于生命现象的复杂性，直观、形象的检测技术在生命科学的研究中起着非常重要的作用。可视化检测手段的出现和发展，使人们能够在一定程度上直接地对生命过程进行观测。物理成像技术研究是目前bio-X研究中的热点课题。 国家973课题“植入前胚胎发育遗传学诊断的分子雷达－光学相干技术系统研究” 。 细胞大 三维 脆弱 低损 发育 动态 四维成像 植入前胚胎发育过程 数据直观的四维量化 研究内容与特点 内容：建立胚胎细胞四维成像手段, 观察小鼠植入前胚胎发育过程的现象，以获得植入前胚胎的遗传诊断信息。 特点：以直观的四维量化的数据表达一个生物学发育过程的信息。 物理原理 单光子激发，采用普通连续激光 采用较高功率的超短脉冲激光（几十fs的脉宽，1fs=10-15秒）激发荧光物质，使之跃迁到激发态时能同时吸收两个光子。 活细胞的四维成像技术 共聚焦成像技术 双光子成像技术 共聚焦显微镜原理 Confocal laser scanning microscopy (CLSM) 位于共轭焦平面的小孔（共聚焦针孔），阻挡了来自焦平面以外的信号 共聚焦针孔的直径直接控制了光学切片的厚度 为什么要用超快激光？ σ： two-photon absorption cross section ( 一般为10- 50 cm4s/ 光子) 单光子激发荧光 在整个照明区 均产生荧光 双光子激发荧光 仅在焦点附近产生荧光 单光子激发的能量特性 Power-lined Dependence of One-Photon-excited Fluorescence 双光子激发的能量特性 Power-Squared Dependence of Two-Photon-excited Fluorescence 双光子与共聚焦的比较 共同点： 分辨率高，信噪比高，光学切片，三维重构 共聚焦缺点 双光子优点 紫外光 近红外光 穿透深度浅 穿透深度深 光毒性大 光毒性小 光漂白区域大