用于基因芯片分析的哺乳动物组织样品RNA抽提博奥生物有限公司.PDF

博奥生物有限公司 北京市昌平区生命科学园路 18 号 邮编：102206 生物芯片北京国家工程研究中心 电话：86-10传真：86-10 网址： 郑重提示：在以下所有可能涉及到用离心管运输含有有机溶剂，例如 Trizol，乙醇等试剂的样品时，建议使用高质量的离心管以防止渗漏；另 外，不要在离心管上直接用 Marker 笔作标记，最好先在离心管上贴上胶 布或者标签纸，而后作标记以防标记被抹去。 用于基因芯片分析的哺乳动物组织样品 RNA 抽提 哺乳动物组织样品 RNA 的抽提最基本的要素是防止RNA 在抽提过程中降解，以及尽可 能得到最高的 RNA 抽提效率。以下介绍我们实验室认为最符合以上两个要素的抽提方 法。 实验材料：Trizol 试剂（Invitrogen 公司） 研钵、匀浆器、镊子、铝箔都高温灭菌即可； 具体过程： 1、样品在离体后应迅速冷冻在液氮中，若是比较大块的组织，要尽量把组织剪切 成黄豆大小的块，使液氮迅速渗透到组织内部而防止组织内部的 RNA 降解。组 织用铝箔包好或放入冻存管中，并做好记号，注意不要把记号写在纸上，以防 纸被组织的血水渗透而导致记号模糊。可以把铝箔放入纱布袋并储存在液氮 中。 2、在抽提 RNA 前，先把研钵预冷，往研钵内反复加入液氮，至少 4－5 次，使研 钵充分预冷。从液氮罐中取出样本后,把组织块放入已预冷的研钵中进行研磨， 边研磨边加液氮 （图1），整个过程都不要使液氮挥干。一次研磨的组织块重量 不要超过 300mg。 第 1 页 图 1、用研钵在液氮中把样品研成粉末 3、研磨到组织样品成粉末状后（一般需要 8-10min 的研磨过程），在液氮基本挥 发完时，在每个研钵中加 2-3ml Trizol 试剂。由于此时研钵很冷，Trizol 加 入后会冻结成固体状（图 2）。可以继续研磨此固体成粉末（图 3），随着研钵 温度回升到室温，固体状的 Trizol 逐步回复到液体状态（图 4），此时，若发 现液体很粘，研杵能牵起丝状物，说明 Trizol 的量太少，需在此步继续补加 Trizol。若 Trizol 的量过少，会导致抽提的 RNA 中有较多的基因组DNA 污染。 由于Trizol 试剂中含有强烈的 RNA 酶抑制剂，因此组织样品和Trizol 充分研 磨混匀后就不用担心 RNA 的降解了。 第 2 页 图2. 在冰冷的研钵中加入Trizol试剂后，Trizol 图 3.继续把成固体状的 Trizol 进行研磨 试剂会冻结成固体 图4.随着研钵的温度回复到室温，Trizol 试剂逐步又变为液体 4、把此 Trizol 试剂转移到玻璃匀浆器中，再进一步匀浆 3-5min（图 5）。 第 3 页 图 5. Trizol 试剂转移到玻璃匀浆器中，再进一步匀浆 5、再把 Trizol 试剂转移到 1.5ml 离心管中 （图6），后续可以按照 Trizol 试剂的 标准操作抽提总 RNA。也可以把此 Trizol 试