人白介素一6表达质粒的-上海师范大学学报.PDFVIP

维普资讯 第32卷第 4期 上海师范大学学报 (自然科学版) Vo1．32。No．4 2003年 12月 JournalofShanghaiNormalUniversity(NaturalSciences) 2003，Dec． 人 白介素一6表达质粒的 构建及在酿酒酵母 中的表达 宋 磊，李新国 (1．上海师范大学 生命与环境科学学院，上海 200234) 摘 要：将带有哺乳动物细胞信号肽 的人 白细胞介素一6(hlL-6)基 因片段构建到大肠杆茵一酵 母细胞穿梭型质粒 pYES2中，获得表达质粒pYES2-hlL-6．另外，将表达质粒pYES2一hIL．6转 化到酿酒酵母细胞DBY747中，并将获得的转化子在含 2 乳糖的YP培养基 中培养到 0D6。。 =1．0左右，后用2 的半乳糖进行了诱导表达．结果发现，在培养上清中发现人 白介素一6的 分 泌． 关键词：人 白介素一6；酿酒酵母；质粒构建；表达 中图分类号：Q5o3 文献标识码 ：A 文章编号 ：1000—5137(2003)04—0073—04 0 引 言 pYES2质粒结构： 5’ ^_l哩 ＆ 睦G 利用大肠杆菌表达系统来生产 hIL_6的 技术研究已比较成熟，并 已达到医学临床研究 阶段．而用酵母等真核细胞来做表达宿主的研 究和开发则很少，并尚未发现用 hlL一6的缩码 前序列为分泌信号肽在酵母细胞中分泌表达 hlL-6的报道[1叫]．因此本文大胆尝试用 hlL-6 基因本身的前导序列作为分泌信号肽，构建了 酿酒酵母表达质粒 pYES2一hlL-6，试图在酵母 pCMVP-hlL-6 细胞 中表达、分泌hIL-6． l 1 材料与方法 1．1 材料 菌株与质粒 图 1 质粒结构 收稿 日期 ：2003·04—02 基金项 目：上海教委科技发展基金(2000Dl1)；上海师范大学校青年基金 (2001DQll5) 作者简介 ：~ (1972．)，女，上海师范大学生命与环境科学学院讲师；李新国(1959_)，男，上海师范大学生命与环境 科学学院副教授． 维普资讯 上海师范大学学报(自然科学版) 2003年 质粒扩增菌 ：大肠杆菌(E．coli)JM 109 宿主菌 ：酵母细胞 (S．cerevisiae)DBY747 质粒 ：pYES2(5．9Kb) CMVPromoter Hm d pCMVP—hIL．6(4．OKb)(图 1) 由 日本九州大学遗传 资源细胞制御研究 室 Shirahada教授惠赠． 1．2 方法 (1)质粒的构建 (图2)c ． I删～醐 眦。 (2)酵母细胞 的转化[7]． (3)在酵母细胞 中的表达：将保存的转化 后的酵母细胞涂布在包含有选择性培养基 的 平皿上，静置，3O℃，过夜．取一个克隆，悬浮于 加入 2mL2O 乳糖 的20mLYP培养基中，震 荡 ，3O℃，过夜