人类性染色质标本的制备-西南医科大学.PPT

实验一 人类性染色质标本的制备、分析和PTC尝味实验 医学细胞生物学与医学遗传学教研室 四川医科大学 目的与要求 1. 掌握：人类间期细胞核中性染色质的形成机制。（重点，难点） 2.熟悉：X染色质标本的制作方法；熟悉人类间期细胞核中性染色质的形态特征和分布。 3.了解： PTC尝味实验方法及这种单基因遗传性状的遗传规律。 （一）性染色质的定义及形成机制 1、几对基本概念 染色质——染色体 常染色质——异染色质 常染色体——性染色体 内 容 步 骤 （一）性染色质的定义及形成机制 1、几对基本概念 性染色质（sex chromatin）： 在间期细胞核中性染色体的异染色质部分显示出来的一种特殊结构，包括X染色质和Y染色质 。 内 容 步 骤 （一）性染色质的定义及形成机制 1、几对基本概念 2、X染色质形成机制——Lyon假说 内 容 步 骤 X染色质 Lyon假说: （1）正常女性体细胞内仅有1条X染色体有活性，另一条X染色体在遗传上是失活的，在间期细胞核中高度螺旋化而呈异固缩的X染色质。 （2）X染色体失活发生在胚胎早期。 （3）X染色体失活的随机性和恒定性。 实质：失活的X染色体 意义：X染色体的剂量补偿 X染色质的数目=X染色体数-1 A、B、C、D、E：分别为含0、1、2、3、4个X染色质 X染色体的数目=X染色质数目+1 （一）性染色质的定义及形成机制 1、几对基本概念 2、X染色质形成机制——Lyon假说 3、Y染色质 内 容 步 骤 Y染色质 在正常男性间期细胞核中，用荧光染料染色后，可观察到一个圆形或椭圆形的直径约为0.3μm的强荧光小体。 实质：Y染色体长臂远端的异染色质 Y染色质的数目=Y染色体数 （二）X染色质标本的制备与观察 内 容 步 骤 1、制作过程： 取材（漱口后用牙签刮取口腔黏膜上皮细胞标本） → 涂片 → 染色（滴1～2滴染液） → 盖片（染色5-8min） → 压片（吸去多余染液） → 镜下观察 2、观察（高倍镜） （1）可记数细胞的判断标准： 细胞核较大，染色清晰，轮廓清楚，无缺损，皱襞。 核质均匀，呈细丝或细粒状 核周围无细菌污染或染料块。 观察注意事项 （1）可记数细胞的判断标准： 细胞核较大，染色清晰，轮廓清楚，无缺损，皱襞。 核质均匀，呈细丝或细粒状 核周围无细菌污染或染料块。 观察注意事项 （2）识别X染色质的标准：（高倍镜下） 位置：紧贴核膜内侧缘，轮廓清楚，唯一深染的小体 大小：直径为1-1.5um，即小于核直径的1/10 形态：一般为平凸形，三角形或为卵圆形 （二）X染色质标本的制备与观察 内 容 步 骤 1、制作过程： 取材（漱口后用牙签刮取口腔黏膜上皮细胞标本） → 涂片 → 染色（滴1～2滴染液） → 盖片（染色5-8min） → 压片（吸去多余染液） → 镜下观察 2、观察（高倍镜） 3、鼓槌标本的观察（示教） 人类女性嗜中性粒细胞分叶核上的球形突出物，实质为X染色质 （三）PTC尝味实验： 1、原理 人类味觉对苯硫脲（又称苯基硫代碳酰二胺，PTC）的敏感性由一对等位基因（T、t）控制，属不完全显性遗传。基因型不同的个体尝出含PTC溶液的浓度有明显的差异。 TT ： 1/750000～1/3000000 Tt ： 1/48000～1/380000 tt ： ＞1/24000或尝不出味道 表：13种浓度的PTC溶液的配制方法 溶液号 稀释方法 稀释倍数 约含P·T·C·的浓度 基因 1 原液 1 1/750  2 原液100ml+水100ml 2 1/1500 3 2号液100ml+水100ml 4 1/3，000 4 3号液100ml+水100ml 8 1/6，000 5 4号液100ml+水100ml 16 1/12，000 6 5号液100ml+水100ml 32 1/24，000 7 6号液100ml+水100ml 64 1/48，000 8 7号液100ml+水100ml 128 1/96，000 9 8号液100ml+水100ml 256 1/190，000 10 9号液100+ml水100ml 512 1/380，000 11 10号液100ml+水100ml 1024 1/750，000 12 11号液100nl+水100ml 2048 1/1，500，000 13 12号液100ml+