第四章节灭菌与空气净化.pptVIP

第四章 发酵工厂灭菌与空气净化;第一节 严格消毒灭菌;4.1.1 严格消毒灭菌;4.1.2发酵工业中灭菌和消毒常用范围;除菌的方法 ;（一）高温杀菌作用的种类 ;;1．干热灭菌法;（1）常压法;间歇灭菌法，又称丁达尔灭菌法或分段灭菌法。适用于不耐热培养基的灭菌。 方法是：将待灭菌的培养基在80～100℃下蒸煮15～60分钟，以杀死其中所有微生物的营养细胞，然后置室温或37℃下保温过夜，诱导残留的芽孢发芽，第二天再以同法蒸煮和保温过夜，如此连续重复3天，即可在较低温度下达到彻底灭菌的效果。;（2）加压法;?连续加压灭菌法;4.1.3高温对培养基成分的有害影响及其防止 ;消除高温有害影响的措施;（3）对含有在高温下易破坏成分的培养基（如含糖组合培养基）可进行低压灭菌（在112℃即0.57kg／cm2或8磅／英寸2下灭菌15分钟）或间歇灭菌； （4）在大规模发酵工业中，可采用连续加压灭菌法进行培养基的灭菌 ;4.1.4灭菌设备 1、高压蒸汽灭菌?? 生产中使用高压蒸汽灭菌锅的型号很多。 手提式灭菌锅，容量小，多用于母种培养基灭菌。 立式或卧式灭菌锅较大，多用于原种或少量栽培种培养基的灭菌，一般能装几十瓶或几百瓶。 灭菌柜要和蒸汽锅炉配套，用于大量的原种和栽培种培养基的灭菌，一次能装几百至几千瓶(袋)。但投资太大，适合大型菌种场使用。;2．常压蒸汽灭菌锅??? 常压蒸汽灭菌锅是用铁锅、砖、水泥砌成的，造价低，适于一般生产单位和专业户使用。大小可根据需要而定，但最大的锅每次装料也最好不超过500公斤。? 3．烘箱?? 烘箱主要是用于玻璃器皿的干燥和灭菌，也可用于其它物品烘干。 ;4.1.5? 培养基的灭菌 ;（一）理论灭菌时间 ; τ =(2.303/k)log(No/Ns) τ---灭菌时间（秒） k---反应速度常数，与菌的种类和加热温度有关（s－１） No---灭菌开始时，污染的培养基中杂菌个数（个／ml） Ns---经过灭菌时间T后，残存活菌个数（个／ml） ;（二）灭菌温度与菌死亡反应速度常数的关系 ;（四）影响培养基灭菌的因素 ;2、培养基成分 培养基的成分中，油脂、糖类、蛋白质都是传热的不良介质，会增加微生物的耐热性，使灭菌困难。 浓度较高的培养基相对需??较高温度和较长时间灭菌。 高浓度的盐类，色素则削弱其耐热性，故较易灭菌。 ;3、培养基中的颗粒物质 培养基中的颗粒物质大，灭菌困难，反之，灭菌容易。一般说来，含有颗粒对培养基灭菌影响不大，但在培养基混有较大颗粒，特别是存在凝结成团的胶体时，会影响灭菌效果，必须过滤除去。 ;4.灭菌物体含菌量的影响。 天然原料尤其是麸皮等植物性原料配成的培养基，一般含菌量较高，而用纯粹化学试剂配制成的组合培养基，含菌量低。;5.灭菌锅内空气排除程度的影响 检验灭菌锅内空气排除度，可采用多种方法。最好的办法是灭菌锅上同时装有压力表和温度计，其次是将待测气体通过橡胶管引入深层冷水中，如只听到“扑扑”声而未见有气泡冒出，也可证明锅内已是纯蒸汽了。　 ;6.灭菌对象的体积。要防止用常规的压力和时间在加压灭菌锅内进行大容量培养基的灭菌。 7.加热与散热速度。这两段时间也对灭菌效果和培养基成分发生影响。为了使科学研究的结果有良好的重演性，在灭菌操作中对这些技术细节都应加以注意。 ;（五）灭菌的实际操作 ;2.实罐灭菌 将培养基置于发酵罐中用蒸汽加热，达到预定灭菌温度后，维持一定时间，再冷却到发酵温度，然后接种发酵，这叫做实罐灭菌，又称分批灭菌。 操作要点： 三路进汽：直接蒸汽从通风、取样和出料口进入罐内直接加热，直到所规定的温度，并维持一定的时间。这就是所谓的“三路进气”。 ;;3.连续灭菌 将配制好的培养基向发酵罐输送的同时加热、保温和冷却。 连续灭菌时，培养基能在短时间内加热到保温温度，并能很快冷却，有利于减少营养物质的破坏。 液体培养基的连续灭菌一般在由配料罐、泵、连消塔、维持罐和喷淋冷却器的连消设备中进行。; 灭菌时间的计算 例：有一发酵罐，内装培养基40m2，在131℃的温度下进行连续灭菌。设每毫升培养基含有耐热菌的芽孢2×107个，在131 ℃时的灭菌速率常数为0.25s-1。试求灭菌失败的机率为0.001所需的时间。 解：;3.培养基连消工艺流程图 ;喷嘴式连消塔 ;维持罐;;喷淋冷却连续灭菌流程;薄板换热器连续灭菌流程;薄板换热器;连续加压灭菌法优点 ;4.1.6过滤除菌法及其它方法;（一）过滤除菌法;（二）其他方法;4.1.7化学杀菌剂或抑菌剂 ;（一）表面消毒剂;为比较各种表面消毒剂的相对杀菌强度，常采用在临床上最早使用的消毒剂——石炭酸作为比较的标准，并提出了石炭酸系数这一指标。 所谓石炭酸系数，指在一定时间内被试药剂能杀死全部供试菌的最高稀释度