第七章 分子发光分析法(荧光、磷光和化学发光)_图文.pptVIP

* * 作业： P221，12-2，12-3 * * 二、荧光分析方法与应用 1. 特点 （1）灵敏度高 比紫外-可见分光光度法高2～4个数量级；为什么？ （光度法 ，检测大信号的微小差别，荧光法小背景下的荧光强度） 检测下限：0.1～0.1?g/cm-3 相对灵敏度：0.05mol/L 奎宁硫酸氢盐的硫酸溶液。 （2）选择性强 既可依据特征发射光谱，又可根据特征吸收光谱； （3）试样量少 缺点：应用范围小。为什么？ * * 2.定量依据与方法 (1)定量依据 荧光强度 If正比于吸收的光量Ia和荧光量子效率? ： If = ? Ia 由朗-比耳定律： Ia = I0(1-10-? l c ) If = ? I0(1-10-? l c ) = ? I0(1-e-2.3? l c ) 浓度很低时，将括号项近似处理后： If = 2.3 ? I0 ? l c = Kc * * （2）定量方法 标准曲线法： 配制一系列标准浓度试样测定荧光强度，绘制标准曲线，再在相同条件下测量未知试样的荧光强度，在标准曲线上求出浓度。 比较法： 在线性范围内，测定标样和试样的荧光强度，比较。 * * 例、还原态的NADH（烟酰胺腺嘌呤二核苷酸还原型或辅酶I还原型）是一种具有高荧光的重要的辅酵素。它在340 nm有最大吸收，在465 nm有最大发射。由标准NADH溶液得到下列荧光强度数据： 浓度 NADH, μM 相对强度 浓度 NADH, μM 相对强度 0.100 13.0 0.500 59.7 0.200 24.6 0.600 71.2 0.300 37.9 0.700 83.5 0.400 49.0 0.800 95.1 * * 请建立一个校正曲线，并用以估计某未知溶液中的NADH浓度，此溶液的荧光相对强度为42.3。 解：以荧光相对强度为纵坐标，以NADH之浓度为横坐标，标出以上八个数据点，以直线相连，即可得到校正曲线如下： * * 相对荧光强度 NADH浓度/μM * * 该曲线的回归方程为： Y = 1.76071 + 116.64286X (r = 0.99978) 将未知溶液的相对强度标于校正曲线上，可得其对应浓度为0.34 μM。或代入回归方程： * * 3.荧光分析法的应用 (1)无机化合物的分析 与有机试剂形成配合物后测量；可测量约60多种元素。 铍、铝、硼、镓、硒、镁、稀土常采用荧光分析法； 氟、硫、铁、银、钴、镍采用荧光熄灭法测定； 铜、铍、铁、钴、锇及过氧化氢采用催化荧光法测定； 铬、铌、铀、碲采用低温荧光法测定； 铈、铕、锑、钒、铀采用固体荧光法测定 (2)生物与有机化合物的分析 见表 * * * * * * 三、磷光分析法的应用 1.稠环芳烃分析 采取固体表面室温磷光分析法快速灵敏测定稠环芳烃和杂环化合物（致癌物质）；见表 2.农药、生物碱、植物生长激素的分析 烟碱、降烟碱、新烟碱、2，4-D（一种植物生长激素）、萘乙酸等分析 检测限0.01 ?g/cm-3 3.药物分析和临床分析 见表 * * * * 重原子效应：I、Br、Pb等称为重原子。在重原子中，能级之间的交叉现象比较严重，因此容易发生自旋轨道的相互作用，增加由单重态转化为三重态的速度，即加快了系间跨越的速度。 这就是卤素取代基随原子序数增加而荧光下降的原因。不难理解，由于重原子效应增加系间跨越的速度，使荧光减弱，磷光则相应增强。 * * * * 一、基本原理 principle 二、化学发光分析的特点 characteristics 三 装置与技术 instrument and technology 第三节 化学发光分析法 chemiluminescenceanalysis * * 一、基本原理 principle 1. 化学发光反应 化学发光不是由光、热、电能所产生的光辐射。在化学反应过程中，某些化合物接受能量而被激发，从激发态返回基态时，发射出一定波长的光。 A + B = C + D* D* → D + h? （1）能够发光的化合物大多为有机化合物，芳香族化合物； （2）化学发光反应多为氧化还原反应，激发能与反应能相当 ?E = 170～300 kJ/mol；位于可见光区；