小鼠IL-4Rα基因shRNA有效靶点的筛选.pptVIP

变应性鼻炎的治疗策略 治疗进展 转录后的抑制是变应性疾病的治疗热点。 反义RNA 和小干扰RNAs (siRNAs)是最为常用的方法. 小干扰RNAs的原理 小干扰RNAs的优势 siRNA 是双链结构, 更稳定; siRNA 不需要化学修饰; RNAi 技术不存RNase H 酶或立体结构抑制作用; RNAi 技术具有效应放大作用, IL-4Rα变应性疾病的重要作用 IL-4和IL-13酪氨酸激酶偶联受体信号通路（Jak-Stat途径）在IgE依赖的变应性反应中起着关键作用 IL-4Rα 是该通路的核心分子 目的 本研究探讨设计IL-4Rα的短发夹RNA（shRNA）序列，并合成IL-4Rα的RNA干扰载体，筛选有效shRNA干扰靶点。 实验步骤 目的基因RNA干扰载体制备 融合蛋白表达载体构建 RNA干扰有效靶点筛选 目的基因RNA干扰载体制备 shRNA载体的构建 PCR鉴定: PCR阳性克隆鉴定图片 正确克隆于表达载体的目的基因片段能够与EGFP融合表达 RNA干扰有效靶点筛选 采用荧光镜检检测目的基因不同的RNAi靶点干扰情况下的敲减效率 采用WesternBlot检测目的基因不同的RNA靶点干扰情况下的敲减效率 3# 靶点对外源表达的目的基因，对蛋白水平有最明显的knockdown作用，灰度分析显示，3# 靶点对Il4ra的knockdown效