斑马鱼sata突变体的鉴定-中国试验动物信息网.PDFVIP

２０１６年１２月 中国实验动物学报 Ｄｅｃｅｍｂｅｒ２０１６ 第２４卷　 第６期 ＡＣＴＡ ＬＡＢＯＲＡＴＯＲＩＵＭ ＡＮＩＭＡＬＩＳ ＳＣＩＥＮＴＩＡ ＳＩＮＩＣＡ Ｖｏｌ． ２４　 Ｎｏ． ６ 研究报告 斑马鱼ｓａｔ１．ａ突变体的鉴定 １ ２ ２ ２ ２ ２ ∗ 万传璐 ，闫一芳 ，王鹏 ，林宇 ，曹羽 ，王强 （１． 安徽大学生命科学学院，合肥　 ２３０６０１；２．中国科学院动物研究所膜生物学国家重点实验室，北京　 １００１０１） 　 　 【摘要】　 目的　 在我们的前期研究工作中，通过Ｔｏｌ２转座子介导的插入突变，筛选到了一批组织特异性表达 绿色荧光蛋白ＧＦＰ 的斑马鱼品系。 其中一个品系Ｔｏｌ２ 的ＧＦＰ在神经系统中表达，但还没有鉴定到Ｔｏｌ２ 转座子插入到基因组什么位置，造成了哪个基因的突变。 本文的主要研究目标就是对这一由Ｔｏｌ２转座子插入诱导 的斑马鱼突变品系进行鉴定。 方法　 使用交错式热不对称ＰＣＲ（ｔｈｅｒｍａｌ ａｓｙｍｍｅｔｒｉｃ ｉｎｔｅｒｌａｃｅｄ ＰＣＲ，ＴＡＩＬ⁃ＰＣＲ）鉴 定Ｔｏｌ２转座子插入的基因组位置；利用原位杂交检测被突变的基因的时空表达是否与该品系ＧＦＰ表达具有一致 性；筛选鉴定纯合体突变体，并进一步分析该基因突变造成的发育缺陷。 结果　 在该品系中，Ｔｏｌ２转座子插入到了 亚精胺／ 精胺Ｎ１⁃乙酰基转移酶 １ａ（ｓｐｅｒｍｉｄｉｎｅ／ ｓｐｅｒｍｉｎｅ Ｎ１⁃ａｃｅｔｙｌｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ １ａ，ｓａｔ１．ａ）的第八个内含子区域，致使 ｓａｔ１．ａ基因转录提前终止。 我们筛选到了ｓａｔ１．ａ纯合突变体，但是没有检测到明显的发育缺陷。 结论　 筛选鉴定 的Ｔｏｌ２转座子介导的斑马鱼ｓａｔ１．ａ突变体没有明显的发育缺陷，但可以作为研究神经系统发育的有力工具。 【关键词】　 斑马鱼；Ｔｏｌ２转座子；ｓａｔ１．ａ；神经系统；原位杂交 【中图分类号】 Ｑ９５⁃３３　 　 【文献标识码】 Ａ　 　 【文章编号】 １００５⁃４８４７（２０１６）０６⁃０５５１⁃０７ Ｄｏｉ：１０３９６９／ ｊ．ｉｓｓｎ．１００５－４８４７２０１６０６００１ Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ａ ｚｅｂｒａｆｉｓｈｓａｔ１．ａ ｍｕｔａｎｔ １ ２ ２ ２ ２ ２ ∗ ＷＡＮ Ｃｈｕａｎ⁃ｌｕ ，ＹＡＮ Ｙｉ⁃ｆａｎｇ ，ＷＡＮＧ Ｐｅｎｇ ，ＬＩＮ Ｙｕ ，ＣＡＯＹｕ ，ＷＡＮＧ Ｑｉａｎｇ （１． Ｓｃｈｏｏｌ ｏｆ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ，Ａｎｈｕｉ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｈｅｆｅｉ，２３０６０１，Ｃｈｉｎａ；２． Ｓｔａｔｅ Ｋｅｙ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ｏｆ Ｍｅｍｂｒａｎｅ Ｂｉｏｌｏｇｙ， Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ｚｏｏｌｏｇｙ，Ｃ