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第一章 蛋白质化学
蛋白质是最重要的生物大分子,同时蛋白质化学在生物化学中也是第一重要的部分。要学好生物化学就一定要首先学好蛋白质化学。蛋白质化学这一章内容很多,重点是蛋白质的结构和功能,其难点是掌握蛋白质或氨基酸的两性解离。为使读者更好地掌握两性解离,本章以氨基酸的两性解离为例进行较详细的解释。
当可解离基团HA或A-发生解离时:
其中Ka与Kb分别为酸式解离常与碱式解离常数:
Ka=[H+]×[A-]/[HA]
Kb=[HA]×[OH-]/([A-]×[H2O])
由于[H2O]可近似看作为1,而[OH-)×[H+]=10-14;
[OH-]=10-14/[H+]
Kb=[HA]×[OH-]/[A-]
=([HA]/[A-]×(10-14/[H+])
=[[HA]/([A-]×[H+])]10-14
=10-14 × 1/Ka
Ka×Kb=10-14
为了使用上的方便,我们把X的负对数用pX表示,把上式两边取负对数:
pKa+pKb=14
这样我们就可以清楚地看到对于同一对解离基团的pKa与pKb之间的关系。一般情况下我们都使用pKa,而pKb使用则较少。在处理pH值与某一可解离基团解离程度之间的关系时,我们就要使用Henderson-Hasselbalch方程,此方程是怎样来的呢,请看:
各成分的摩尔浓度为[HA] [H+][A-]
Ka=([H+]×[A-]/[HA]=[H+]×([A-]/[HA])
两边取负对数:pKa=pH-Ig([A-]/[HA])
Ph=pKa+1g([A-]/[HA])=pKa+1g([碱]/[碱])
上式即为Hendreson-Hasselbalch方程。在这里,可以接受H+的A-被看作是广义碱,而能释放H+的HA被看作是广义的酸。一般来说在一定条件下某一可解离基团解离常数是不变的,pKa也是定值。PH与基团解离之间的关系为:当pH>pKa([碱]/[酸])为正值、[碱]>[酸];当pH=pKa时1g([碱]/[酸]为0、[碱]=[酸](各占50%);当pH<pKa时1g([碱]/[酸])为负值、[碱]<[酸]。
[例1](a)Tris是一个弱酸(Ka=8.3×10-9mol/L,8.00时,Tris有其共轭酸(Tris-H+)的比值是多少?(b)若上述溶液中Tris的总浓度为100mmol/L,在加入5mmol/L(H+)后,溶液pH值是多少?若Tris的总浓度减少到20mmol/L,pH变化又是多少?
解:(a)因为pH=pKa+1g([Tris-H+])
pKa=-1gKa=8.08
所以8.00=8.08+1g([Tris]/[Tris-H+])
[Tris]/[Tris-H+]=0.83
(b)若[Tris]+[Tris-H+]=100mmol/L
则根据(a)中结果可得:
[Tris]=45mmol/L
[Tris-H+]=55mmol/L
当加入5mmol/LH+后,则[Tris]减少5mmol/L,而[Tris-H+]增加5mmol/L,即:
[Tris]=4 0mmol/L
[Tris-H+]=60mmol/L
因此 pH=pKa+1g([Tris]/[Tris-H+])
8.08+1g(40/60)=7.9
即加入5mmol/LH+可使pH降低0.1单位。
若Tris的总浓度为20mmol/L,则
[Tris]+[Tris-H+]=20mmol/L
[Tris]/[Tris-H+]=0.83
所以
[Tris]=9mmol/L
[Tris-H+]=11mmol/L
加入5mmol/LH+后,则[Tris]减少4mmol/L,而[Tris-H+]增加16mmol/L,
pH=pKa+1g([Tris]/[Tris-H+])
8.08+1g4/16)=7.48
即此时加入5 mmol/L可使pH降低0.52个单位。
[例2] 2 mmol/L酸性缓冲液中含1 mmol/L HA 和1 mmol/L A-,pH=pKa=5(Ka=10-5)。若向1L缓冲液中加入0.5 pH=pKa+1g量的H+(假定缓冲液体积仍是1L)。
(a)求A-和HA的准确浓度和溶液的pH值。
(b)假设HA的增另(A的减少)刚好等于加入H+的数量,计算A-和HA的浓度和溶液的pH值。
解:(a)设加入H+后有Y量的H+被A-结合成HA,则
[A-]最终=10×10-4-
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