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细胞总RNA的提取 (2010-01-20 20:58:41)  HYPERLINK javascript:; 转载 标签：  HYPERLINK /c.php?t=blogk=%D4%D3%CC%B8ts=bpoststype=tag \t _blank 杂谈提取细胞RNA的步骤：1)??六孔板每孔细胞中加入1ml Trizol，冰上放置5min，枪头吹打。2)??将各孔裂解液吸到1.5 ml EP管中，加入氯仿0.2ml/管，用力振摇15s。15－30℃下孵育2-3min，离心（4℃，12，000g，15min）。3)??离心后液体分为三层（上层－无色水样层为RNA，中层白色为DNA和底层红色为蛋白质），小心吸取上层无色液体移入一新的EP管中。4)??加入等体积异丙醇，0.4－0.5ml，混匀，15-30℃下孵育10－30min，离心（4℃，12，000g，10min）。其中如果加入等体积异丙醇后，置于试管架上用PE手套密封后，放于4℃冰箱中，沉淀30min效果更好。5)??去上清，沉淀加入75％乙醇1ml，漩涡振荡30s，离心（4℃，7，500g，5min）。6)??小心去上清，管内沉淀在超净台中鼓风静置干燥3-5min。最好是用枪头吸取上清，尽量除去。7)??加入20ul DEPC水溶解，分装5ul/管，-70℃冰箱保存。8)??细胞总