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发酵 第四章 种子的扩大培养
* 第四章 种子的扩大培养 种子扩大培养的目的与要求 种子制备实例 种子制备的技术概要 种子扩大培养是指将保存在砂土管、冷冻干燥管中处休眠状态的生产菌种接入试管斜面活化后,再经过扁瓶或摇瓶及种子罐逐级扩大培养,最终获得一定数量和质量的纯种过程。这些纯种培养物称为种子。 第一节 种子扩大培养的目的与要求 种子扩大培养的概念: 种子扩培的目的 接种量的需要 菌种的驯化 缩短发酵时间、保证生产水平 种子的要求: 总量及浓度能满足要求 生理状况稳定,个体与群体 活力强,移种至发酵后,能够迅速生长 无杂菌污染 第一节 种子制备过程举例 一、谷氨酸生产的种子制备 制备过程 斜面菌种 →一级种子培养 →二级种子培养 →发酵 1、斜面 (AS1.299) 培养基:蛋白胨 1%,牛肉膏1%,氯化钠 0.5 琼脂 2%, pH 7.0-7.2 培养基特点:有利于菌体的生长,原料比较精细 培养条件:32℃,生长18-24小时 生长斜面要求:生长良好,所使用斜面连续传代不超过 3次 2. 一级种子(摇瓶) 培养条件:于1000ml三角瓶中,装液200-250ml,32℃培 养12小时。 培养基:葡萄糖2%,尿素0.5%,玉米浆 2.5%, K2HPO4 0.1% 培养基特点:有利于菌体的生长,所使用的原料已经基 本接近于发酵培养基 3. 二级种子(种子罐) 培养条件:在种子罐中培养(容积为发酵罐的1%), 32℃培养7-10个小时 培养基:和一级种子相似,其中葡萄糖用水解糖代替, 浓度为2.5% 培养基的特点:长菌体,更接近于发酵培养基 种子的质量要求: 108-109个/ml 大小均匀,呈单个或八字排列 PH 7.0-7.2时结束,6.8→8→7.0-7.2 活力旺盛 二、青霉素生产的种子制备 制备过程 安培管 → 斜面孢子 → 大米孢子 → 一级种子 → 二级种子 → 发酵 一、斜面孢子 培养基:甘油、 葡萄糖、 蛋白胨等 培养基特点:有利于长孢子,用量少而精细 培养条件:25℃、7天, 注意湿度50%左右 二、大米孢子 培养基:大米及氮源(玉米浆) 培养基的特点:成本低、米粒之间结构疏松提高比表面积和氧的传质,营养适当(要求大米的白点小)有利于孢子的生长。 培养条件:25℃、7天,控制湿度 大米孢子的要求:1粒米含1.4*106个孢子 3、一级种子 培养基:(葡萄糖、乳糖、蔗糖)、玉米浆 目的:长菌体 培养条件:27℃,40小时 接种量:200亿孢子/吨 4、二级种子 培养基:同上 培养条件:27℃、10-14小时 接种量:10% 种子的质量要求 菌丝长稠呈丝状、菌丝团很少,有中小空孢,处于Ⅲ—Ⅳ期 青霉素发酵菌丝体的生长共分为6个期,1-4为年青期,4-6期合成青霉素的能力最强 第二节 种子制备的技术概要 一、种子制备的过程 实验室阶段:不用种子罐,所用的设备为培养箱、摇床等实验室常见设备,在工厂这些培养过程一般都在菌种室完成,因此现象地将这些培养过程称为实验室阶段的种子培养。 生产车间阶段:种子培养在种子罐里面进行,一般在工程归为发酵车间管理,因此形象地称这些培养过程为生产车间阶段。 二、实验室阶段 1、培养物选择的原则 目的:种子扩培到一定的量和质,根据菌种的特点最终的培养物可分为两类: 对于不产孢子和芽胞的微生物 ——获得一定数量和质量的菌体 对于不产芽孢和孢子的微生物,实验室阶段的种子扩培最终是获得一定数量和质量的菌体,如谷氨酸的种子培养。 获得一定数量和质量的孢子 菌丝体培养步骤少,因而更容易获得量和质稳定的种子,但操作繁琐。 对于产孢子的微生物 获得一定数量和质量的菌丝体 便于操作,但需要更仔细的控制。 2、培养基选择的原则 培养基的选择应该是有利于菌体的生长,对孢子培养基应该是有利于孢子的生长。 在原料方面,实验室种子培养阶段,规模一般比较小,因此为了保证培养基的质量,培养基的原料一般都比较精细。 3、起始接种物的传代问题 细菌 保藏斜面 → 活化斜面 产孢子 保藏 → 母斜面 → 子斜面 目的:使菌种的传代次数尽可能的少。 母瓶:活化、纯化,使保藏菌种生长,并去处变异株。 所以接种时要稀一点、便于纯化生长到单菌落。 子瓶: 大量繁殖,得到大量孢子。 接种:①从母斜面上点接种,选取生长好的
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