发酵 第四章 种子的扩大培养.ppt

* 第四章 种子的扩大培养 种子扩大培养的目的与要求 种子制备实例 种子制备的技术概要 种子扩大培养是指将保存在砂土管、冷冻干燥管中处休眠状态的生产菌种接入试管斜面活化后，再经过扁瓶或摇瓶及种子罐逐级扩大培养,最终获得一定数量和质量的纯种过程。这些纯种培养物称为种子。 第一节 种子扩大培养的目的与要求 种子扩大培养的概念: 种子扩培的目的 接种量的需要 菌种的驯化 缩短发酵时间、保证生产水平 种子的要求： 总量及浓度能满足要求 生理状况稳定，个体与群体 活力强，移种至发酵后，能够迅速生长 无杂菌污染 第一节 种子制备过程举例 一、谷氨酸生产的种子制备 制备过程 斜面菌种 →一级种子培养 →二级种子培养 →发酵 1、斜面 (AS1.299) 培养基：蛋白胨 1%，牛肉膏1%，氯化钠 0.5 琼脂 2%， pH 7.0-7.2 培养基特点：有利于菌体的生长，原料比较精细 培养条件：32℃，生长18-24小时 生长斜面要求：生长良好，所使用斜面连续传代不超过 3次 2. 一级种子（摇瓶） 培养条件：于1000ml三角瓶中，装液200-250ml,32℃培 养12小时。 培养基：葡萄糖2%，尿素0.5%，玉米浆 2.5%， K2HPO4 0.1% 培养基特点：有利于菌体的生长，所使用的原料已经基 本接近于发酵培养基 3. 二级种子(种子罐) 培养条件：在种子罐中培养（容积为发酵罐的1%）， 32℃培养7-10个小时 培养基：和一级种子相似，其中葡萄糖用水解糖代替， 浓度为2.5% 培养基的特点：长菌体，更接近于发酵培养基 种子的质量要求： 108-109个/ml 大小均匀，呈单个或八字排列 PH 7.0-7.2时结束，6.8→8→7.0-7.2 活力旺盛 二、青霉素生产的种子制备 制备过程 安培管 → 斜面孢子 → 大米孢子 → 一级种子 → 二级种子 → 发酵 一、斜面孢子 培养基：甘油、 葡萄糖、 蛋白胨等 培养基特点：有利于长孢子，用量少而精细 培养条件：25℃、7天, 注意湿度50%左右 二、大米孢子 培养基：大米及氮源（玉米浆） 培养基的特点：成本低、米粒之间结构疏松提高比表面积和氧的传质，营养适当（要求大米的白点小）有利于孢子的生长。 培养条件：25℃、7天，控制湿度 大米孢子的要求：1粒米含1.4*106个孢子 3、一级种子 培养基：（葡萄糖、乳糖、蔗糖）、玉米浆 目的：长菌体 培养条件：27℃，40小时 接种量：200亿孢子/吨 4、二级种子 培养基：同上 培养条件：27℃、10-14小时 接种量：10% 种子的质量要求 菌丝长稠呈丝状、菌丝团很少，有中小空孢，处于Ⅲ—Ⅳ期 青霉素发酵菌丝体的生长共分为6个期，1-4为年青期，4-6期合成青霉素的能力最强 第二节 种子制备的技术概要 一、种子制备的过程 实验室阶段：不用种子罐，所用的设备为培养箱、摇床等实验室常见设备，在工厂这些培养过程一般都在菌种室完成，因此现象地将这些培养过程称为实验室阶段的种子培养。 生产车间阶段：种子培养在种子罐里面进行，一般在工程归为发酵车间管理，因此形象地称这些培养过程为生产车间阶段。 二、实验室阶段 1、培养物选择的原则 目的：种子扩培到一定的量和质，根据菌种的特点最终的培养物可分为两类： 对于不产孢子和芽胞的微生物 ——获得一定数量和质量的菌体 对于不产芽孢和孢子的微生物，实验室阶段的种子扩培最终是获得一定数量和质量的菌体，如谷氨酸的种子培养。 获得一定数量和质量的孢子 菌丝体培养步骤少，因而更容易获得量和质稳定的种子，但操作繁琐。 对于产孢子的微生物 获得一定数量和质量的菌丝体 便于操作，但需要更仔细的控制。 2、培养基选择的原则 培养基的选择应该是有利于菌体的生长，对孢子培养基应该是有利于孢子的生长。 在原料方面，实验室种子培养阶段，规模一般比较小，因此为了保证培养基的质量，培养基的原料一般都比较精细。 3、起始接种物的传代问题 细菌 保藏斜面 → 活化斜面 产孢子 保藏 → 母斜面 → 子斜面 目的：使菌种的传代次数尽可能的少。 母瓶：活化、纯化，使保藏菌种生长，并去处变异株。 所以接种时要稀一点、便于纯化生长到单菌落。 子瓶: 大量繁殖，得到大量孢子。 接种：①从母斜面上点接种，选取生长好的