1.2shang基因工程的基本操作程序-人教版选修3.ppt

1.2 基因工程的基本操作程序 1、目的基因的获取 2、基因表达载体的构建 3、将目的基因导入受体细胞 4、目的基因的检测与鉴定 基因工程基本操作的四个步骤 一、目的基因的获取 (一)、目的基因主要是______________________ 编码蛋白质的基因 （二）、获取目的基因的常用方法有哪些? 1、从基因文库中获取 2、利用PCR技术扩增 3、人工合成 阅读教材P8-11 如：与生物抗性相关的基因、与优良品质相关的基因、与生物药物和保健品相关的基因、与毒物降解相关的基因、与工业用酶相关的基因、具调控作用的因子等。 1、从基因文库中获取目的基因 （1）.基因文库 将含有某种生物不同基因的许多DNA片断，导入到受体菌的群体中，各个受体菌分别含有这种生物的不同基因，称为基因文库。 种类 基因组文库：含有一种生物的全部基因 部分基因文库：只包含了一种生物的部分基因， 如：cDNA文库 非编码区 非编码区 编码区 RNA聚合酶结合位点 外显子 内含子 终止子 基因的结构 启动子 原核 真核 原核细胞 真核细胞 不同点 编码区是_____ 的，边_________边_________ 编码区是间隔的、 _____的，先_____后_____ 相同点 都由能够编码蛋白质的______和具有调控作用的______区组成的 原核细胞与真核细胞的基因结构比较 连续 不连续 编码区 非编码 转录 翻译 转录 翻译 1．下列关于基因结构的认识中，正确的是 （ ） A．大豆基因中内含子是能够编码蛋白质的序列 B．乳酸菌与酵母菌基因结构中都存在外显子和内含子 C．大肠杆菌基因与RNA聚合酶结合位点位于编码区的下游 D．水稻细胞基因的编码区中存在非编码序列 D 提取某种生物的全部DNA 用适当的限制酶酶切 一定大小的DNA片段 将DNA片段与载体连接 重组载体 基因组文库 导入受体菌中储存 （2）.基因文库的构建方法 ①基因组文库的构建 提取某种生物的某器官或特定发育时期的mRNA 单链DNA 双链cDNA片段 重组载体 与载体连接 cDNA文库 反（逆）转录酶 DNA聚合酶 导入受体菌中储存 ② cDNA文库的构建-----逆转录法： 真核生物的基因用逆转录法得到的cDNA与原基因相同吗？有哪些差异？原核生物基因呢？ 思考？ 编码区 非编码区 非编码区 DNA聚合酶 剪接有关的酶 RNA聚合酶 mRNA前体 mRNA 单链DNA cDNA 逆转录酶 转录 剪接 逆转录 复制 启动子 终止子 基因 不含非编码系列。即不含非编码区和内含子 某生物体内全部DNA 许多DNA片段 受体菌群体 限制酶 与运载体连接导入 基因组文库 cDNA 反转录 受体菌群体 与运载体连接导入 部分基因文库 （cDNA文库） 基因组DNA文库与cDNA文库的比较 某种生物某个时期的mRNA 构建基因组DNA文库时，首先应分离细胞的 A、染色体DNA?? B、线粒体DNA C、总mRNA?? D、tRNA 目的基因可从基因文库中获得，下列有关基因文库的描述正确的是 A、某生物的全套基因就是一个基因文库 B、将含有某种生物不同的许多DNA片段，导入某个生物 体内，则这个生物就是一个基因文库 C、含有一种生物所有基因的基因文库叫做基因组文库 D、含有一种生物的一部分基因的基因文库叫cDNA文库 A C 2、利用PCR技术扩增目的基因 ① 概念：PCR全称为_______________，是一项 在生物____复制___________的核酸合成技术。 ②原理：__________ 多聚酶链式反应 体外 特定DNA片段 DNA复制 PCR技术 原理： 前提： 原料： 优点 过程： PCR扩增仪 DNA复制 已知目的基因的一段核苷酸序列 ：以_____方式扩增， 在短时间内大量扩增目的基因 指数 模板DNA；DNA引物；四种脱氧核苷酸；热稳定DNA聚合酶（Taq酶）；离子 变性 复性 延伸 ③过程： a、DNA变性（90℃-95℃）：双链DNA模板在热作用下，_____断裂，形成________ b、退火（复性55℃-65℃）：系统温度降低，引物与DNA模板结合，形成局部________。 c、延伸（70℃-75℃）：在Taq酶的作用下，合成与模板互补的________。 氢键 单链DNA 双链 DNA链 d.重复a.b.c步骤：每重复一次，目的基因增加___倍 一 PCR反应体系中目的基因成指数(2n)形式扩增 ④方式：以_____方式扩增，即____（n为扩增循环的次数） ⑤条件：__________________