第二章微生物学研究方法.pptVIP

（1） 稀释倒平板法 将欲分离菌液稀释成不同稀释度，取各稀释度菌液少量，加入无菌培养皿，然后加入灭菌温热（大约45~50 ℃ ）的培养基，混匀培养。 （2） 涂布平板法 将已熔化的培养基倒入无菌平皿，制成无菌平板，冷却凝固后，将一定量的某一稀释度的样品悬液滴加在平板表面，再用无菌玻璃涂棒将菌液均匀分散至整个平板表面，经培养后挑取单个菌落，再划线培养。 倒置相差显微镜 相差状态 非相差状态 婴儿皮肤干细胞？ 倒置相差荧光显微镜 荧光显微镜 S. pneumoniae Streptococcus pneumoniae in spinal fluid. FA stain (digitally colorized). CDC/Dr. M.S. Mitchell 链球菌 激光共聚焦扫描显微镜 E. coli with fimbriae 激光扫描共聚焦显微镜 产单鞭毛细菌的形态 扫描电子显微镜 观察外部形态 扫描电子显微镜 双歧杆菌 葡萄球菌 扫描电子显微镜下的微生物 肺炎双球菌 产鞭毛细菌的鞭毛 Group A streptococcus (S. pyogenes)，A型化脓性链球菌 Streptococcus pyogenes – coccoid prokaryote (dividing) Group A strep. SEM x56,000 ? Dr Dennis Kunkel, University of Hawaii. Used with permission Scanning Electron Micrograph of Streptococcus pneumoniae. CDC/Dr. Richard Facklam rrf2@cdc.gov 肺炎链球菌 C. botulinum Rod shaped prokaryote. Vegetative and spore stages: note the flagella on the vegetative cells. Causes botulism. SEM left x15,400, right x12,800 ? Dr Dennis Kunkel, University of Hawaii. Used with permission 肉毒梭菌 PSEUDOMONAS AERUGINOSA Scanning Electron Micrographs of Pseudomonas aeruginosa CDC 假单胞菌 ENTEROBACTERIACEAE 肠细菌 Rod-Shaped Bacterium, E. coli (division) (SEM x22,245) E. coli (0157:H7) a rod prokaryote. Hemorrhagic type ? Dr Dennis Kunkel, University of Hawaii. Used with permission VIBRIOS弧菌 Vibrio cholerae - vibrio-shaped prokaryote that causes cholera (x 15,575) ? Dr Dennis Kunkel, University of Hawaii. Used with permission 霍乱弧菌 透视电子显微镜 制作切片，观察细胞内部结构 光学显微镜下的四联球菌，100x 透视电镜下的四联球菌 产芽孢细菌在光镜和透射电镜下的形态 成熟芽胞的电镜照片 第二节 无菌技术 一、无菌技术 二、无菌操作 三、无菌操作的要求 一、无菌技术的概念 无菌技术是在分离、转接及培养纯培养物时防止其污染环境及被其他微生物污染的技术。 能够保证无菌状态的操作称为无菌操作，能够实现无菌操作的技术，称为无菌技术。 无菌概念：实际上是指“有菌概念”，即微生物无处不在，操作时应时刻谨防被其它微生物污染。 现代无菌技术是由法国人阿贝特（ Appert ）在食品保藏中偶然发现的。 而对灭菌技术的原理等作出科学解释的是巴斯德，他的曲颈瓶实验，不仅彻底否定了当时十分流行的“生命自然发生的学说”，而且为微生物学中的无菌技术的创立和发展奠定了理论和实践基础。 无菌操作技术 接种环，酒精灯 试管、棉塞（硅胶塞） 能够保证无菌状态的操作称为无菌操作 无菌操作技术 无菌操作技术 三、无菌操作要求 1、操作环境无菌（接触面、空气的无菌） 2、操作过程无菌 （不与有菌物品接触） 3、操作介质无菌（所接触物品均应无菌） 4、操作人员的无